การตรวจทางอณูวิเคราะห์และการตรวจหาเชื้อ HPV ในสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยา

การตรวจทางอณูวิเคราะห์ในสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยาเป็นการประยุกต์ใช้การตรวจวิเคราะห์แบบอาศัยกรดนิวคลีอิกกับเซลล์ที่ได้จากการขูดหรือการดูด เพื่อตรวจหาดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอที่เป็นเป้าหมาย ซึ่งบ่งชี้ถึงการติดเชื้อ การกลายพันธุ์ หรือการเปลี่ยนแปลงอื่น ๆ ที่มีความเกี่ยวข้องทางคลินิก การตรวจหาเชื้อฮิวแมนแพปพิลโลมาไวรัส (HPV) ชนิดความเสี่ยงสูงในสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยาของปากมดลูกเป็นตัวอย่างที่แพร่หลายที่สุด ในขณะที่การจัดลำดับสารพันธุกรรมจากสิ่งส่งตรวจจากการดูดด้วยเข็มละเอียด (fine-needle aspirates) ได้ขยายขอบเขตการวินิจฉัยทางอณูวิเคราะห์ไปยังเนื้องอกแข็ง

Definition

การตรวจทางอณูวิเคราะห์ในสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยาคือการประยุกต์ใช้การตรวจวิเคราะห์แบบอาศัยกรดนิวคลีอิก ซึ่งรวมถึงการตรวจหาดีเอ็นเอของไวรัสและการทำโปรไฟล์การกลายพันธุ์ของเนื้องอก กับเซลล์ที่ได้จากการตรวจเซลล์วิทยาแบบขูดหรือดูด หรือกับวัสดุเหลือใช้จากของเหลว

Scope

บทความนี้ครอบคลุมการใช้วัสดุเซลล์วิทยาและวัสดุเหลือใช้จากของเหลวเป็นแหล่งของกรดนิวคลีอิก การตรวจหาเชื้อ HPV ในการคัดกรองมะเร็งปากมดลูก และการตรวจวิเคราะห์ทางอณูวิเคราะห์ที่กว้างขึ้น เช่น การจัดลำดับสารพันธุกรรมยุคใหม่ (next-generation sequencing) จากสิ่งส่งตรวจจากการดูด บทความนี้เป็นการนำเสนอภาพรวมของระเบียบวิธีและข้อมูลอ้างอิง และไม่ได้ให้คำแนะนำเกี่ยวกับระเบียบวิธีการคัดกรองหรือแนวทางการรักษา

Core questions

• ปัจจัยก่อนการวิเคราะห์ใดบ้างที่กำหนดว่าวัสดุเซลล์วิทยาจะให้กรดนิวคลีอิกเพียงพอสำหรับการตรวจหรือไม่?
• การตรวจหา HPV ชนิดความเสี่ยงสูงเสริมการตรวจเซลล์วิทยาปากมดลูกทางสัณฐานวิทยาในการคัดกรองได้อย่างไร?
• การตรวจทางอณูวิเคราะห์ใดบ้างที่สามารถทำได้กับสิ่งส่งตรวจจากการดูดด้วยเข็มละเอียดและวัสดุเซลล์วิทยาที่เหลืออยู่?

Key concepts

• การสกัดกรดนิวคลีอิกจากวัสดุเซลล์วิทยา
• การตรวจหา HPV ชนิดความเสี่ยงสูง
• เซลล์วิทยาแบบอาศัยของเหลวเป็นสารตั้งต้นทางอณูวิเคราะห์
• กลยุทธ์การตรวจแบบสะท้อนกลับและการตรวจร่วม
• การจัดลำดับสารพันธุกรรมยุคใหม่จากสิ่งส่งตรวจจากการดูด
• ความเพียงพอของสิ่งส่งตรวจสำหรับการตรวจทางอณูวิเคราะห์

Mechanisms

สิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งการเตรียมสิ่งส่งตรวจแบบอาศัยของเหลว จะคงสภาพเซลล์และของเหลวที่เหลืออยู่ ซึ่งสามารถสกัดดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอออกมาได้ กรดนิวคลีอิกเหล่านี้จะถูกตรวจสอบโดยการเพิ่มปริมาณ การผสม หรือการจัดลำดับสารพันธุกรรม ในการประยุกต์ใช้กับปากมดลูก การตรวจวิเคราะห์จะตรวจหาดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอของ HPV ชนิดความเสี่ยงสูง ซึ่งการติดเชื้ออย่างต่อเนื่องเป็นสาเหตุของการเกิดมะเร็งปากมดลูก และการตรวจดังกล่าวสามารถใช้ร่วมกับหรือใช้แทนการตรวจเซลล์วิทยาทางสัณฐานวิทยาได้ ในการตรวจเซลล์วิทยาของเนื้องอกแข็ง วัสดุที่ได้จากการดูดด้วยเข็มละเอียดสามารถให้กรดนิวคลีอิกเพียงพอสำหรับการจัดลำดับสารพันธุกรรมแบบจำเพาะเป้าหมายหรือแบบยุคใหม่ เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงที่เกี่ยวข้องกับการวินิจฉัยหรือการรักษา

Clinical relevance

การตรวจทางอณูวิเคราะห์เปลี่ยนสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยาให้เป็นแหล่งข้อมูลทางพันธุกรรมและไวรัสที่ใช้ในการจำแนกประเภท การแบ่งชั้นความเสี่ยง และการรายงานตัวบ่งชี้ทางชีวภาพ โดยเฉพาะอย่างยิ่งการตรวจหาเชื้อ HPV ได้เปลี่ยนแปลงกระบวนทัศน์การคัดกรองมะเร็งปากมดลูกอย่างมาก บทความนี้อธิบายวิธีการดำเนินการตรวจดังกล่าว; อัลกอริทึมการคัดกรองเฉพาะและการตัดสินใจตามตัวบ่งชี้ทางชีวภาพเป็นเรื่องทางคลินิกและไม่ใช่คำแนะนำเฉพาะบุคคลในที่นี้

Epidemiology

การติดเชื้อ HPV ชนิดความเสี่ยงสูงอย่างต่อเนื่องเป็นสาเหตุที่จำเป็นของการเกิดมะเร็งปากมดลูกเกือบทั้งหมด ซึ่งทำให้การตรวจหากรดนิวคลีอิกของไวรัสในสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยาของปากมดลูกเป็นเป้าหมายการคัดกรองที่มีพื้นฐานทางชีวภาพ (Schiffman et al., 2007)

Evidence & guidelines

หลักฐานการคัดกรองแบบสุ่ม รวมถึงผลลัพธ์สิ้นสุดการศึกษาจาก ATHENA ได้ประเมินการตรวจ HPV ขั้นต้นเป็นกลยุทธ์การคัดกรองมะเร็งปากมดลูกด่านแรกเมื่อเทียบกับแนวทางที่อาศัยเซลล์วิทยา (Wright et al., 2015) สำหรับเนื้องอกแข็ง การศึกษาแสดงให้เห็นว่าการจัดลำดับสารพันธุกรรมยุคใหม่สามารถทำได้ในสิ่งส่งตรวจเซลล์วิทยาจากการดูดด้วยเข็มละเอียดเพื่อการวินิจฉัยทางอณูวิเคราะห์ (Qiu et al., 2015)

History

การค้นพบว่า HPV ชนิดความเสี่ยงสูงเป็นสาเหตุที่จำเป็นของมะเร็งปากมดลูกได้เปลี่ยนการตรวจเซลล์วิทยาปากมดลูกจากการคัดกรองทางสัณฐานวิทยาอย่างเดียวไปสู่การตรวจร่วมทางอณูวิเคราะห์ และต่อมาเป็นการคัดกรอง HPV ขั้นต้น ในขณะเดียวกัน การเติบโตของการบำบัดมะเร็งแบบจำเพาะเป้าหมายได้ผลักดันการปรับใช้การตรวจวิเคราะห์ทางอณูวิเคราะห์และการจัดลำดับสารพันธุกรรมกับสิ่งส่งตรวจขนาดเล็กที่ได้จากการดูดด้วยเข็มละเอียด

Debates

การตรวจ HPV ขั้นต้นควรเข้ามาแทนที่การคัดกรองมะเร็งปากมดลูกที่อาศัยเซลล์วิทยาหรือไม่?

การทดลองเช่น ATHENA สนับสนุนการตรวจ HPV ขั้นต้นเป็นวิธีการคัดกรองด่านแรก แต่การผสมผสานที่เหมาะสมที่สุดของการตรวจ HPV, เซลล์วิทยา และการคัดแยกผู้ป่วยยังคงเป็นที่ถกเถียงและแตกต่างกันไปในแต่ละโครงการคัดกรอง

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

สามารถทำการตรวจทางอณูวิเคราะห์กับสิ่งส่งตรวจเดียวกันที่ใช้ในการตรวจเซลล์วิทยาได้หรือไม่?

บ่อยครั้งที่ทำได้ การเตรียมสิ่งส่งตรวจเซลล์วิทยาแบบอาศัยของเหลวจะคงสภาพเซลล์และของเหลวที่เหลืออยู่ ซึ่งสามารถสกัดกรดนิวคลีอิกออกมาได้ ทำให้สามารถตรวจหา HPV หรือการตรวจทางอณูวิเคราะห์อื่น ๆ จากสิ่งส่งตรวจเดียวกันได้

เหตุใดจึงใช้การตรวจ HPV ในการคัดกรองมะเร็งปากมดลูก?

การติดเชื้อ HPV ชนิดความเสี่ยงสูงอย่างต่อเนื่องเป็นสาเหตุที่จำเป็นของการเกิดมะเร็งปากมดลูกเกือบทั้งหมด ดังนั้นการตรวจหากรดนิวคลีอิกของไวรัสจึงเป็นการระบุประชากรที่มีความเสี่ยงและเสริม หรือในบางโครงการ ก็เป็นการนำหน้าการตรวจเซลล์วิทยาทางสัณฐานวิทยา