อิมมูโนไซต์เคมีและการใช้เครื่องหมายเซลล์

อิมมูโนไซต์เคมี (Immunocytochemistry, ICC) คือการประยุกต์ใช้การย้อมสีด้วยแอนติบอดีกับการเตรียมเซลล์วิทยา เพื่อตรวจหาแอนติเจนโปรตีนจำเพาะในหรือบนเซลล์ การเปิดเผยอิมมูโนฟีโนไทป์ของเซลล์ช่วยในการกำหนดสายกำเนิด แยกแยะกระบวนการปฏิกิริยาจากกระบวนการเนื้องอก ระบุตำแหน่งหลักของการแพร่กระจาย และตรวจหาเครื่องหมายที่การตรวจทางสัณฐานวิทยาเพียงอย่างเดียวไม่สามารถแสดงได้

Definition

อิมมูโนไซต์เคมีเป็นเทคนิคเสริมที่ใช้แอนติบอดีที่มีฉลากเพื่อระบุตำแหน่งแอนติเจนโปรตีนจำเพาะในการเตรียมเซลล์วิทยา สร้างโปรไฟล์อิมมูโนฟีโนไทป์ที่เสริมการวินิจฉัยทางสัณฐานวิทยา

Scope

เนื้อหานี้ครอบคลุมหลักการของการระบุตำแหน่งแอนติเจน-แอนติบอดีบนสเมียร์, การเตรียมเซลล์แบบเหลว, ไซโตสปิน และเซลล์บล็อก; แผงเครื่องหมายที่ใช้ในการตอบคำถามการวินิจฉัยทั่วไป; และปัจจัยก่อนการวิเคราะห์และการแปลผลที่จำเพาะต่อวัสดุทางเซลล์วิทยา โดยถือว่า ICC เป็นหัวข้อทางระเบียบวิธี ไม่ใช่แหล่งที่มาของระเบียบวิธีวินิจฉัย

Core questions

• การเตรียมและการตรึงตัวอย่างมีผลต่อการคงสภาพของแอนติเจนและคุณภาพการย้อมสีในเซลล์วิทยาอย่างไร?
• แผงเครื่องหมายใดที่สามารถแยกแยะการวินิจฉัยแยกโรคหลักในตัวอย่างเซลล์วิทยาที่กำหนดได้?
• ควรเก็บรักษาวัสดุเซลล์วิทยาที่มีจำกัดอย่างไร เพื่อให้สามารถทำการตรวจอิมมูโนพาเนลได้อย่างเพียงพอ?

Key concepts

• ระบบการจับและการตรวจจับแอนติเจน-แอนติบอดี
• เซลล์บล็อกเทียบกับสเมียร์และพื้นผิวแบบเหลว
• แผงเครื่องหมายแทนการย้อมสีเดี่ยว
• เครื่องหมายสายกำเนิดและแหล่งกำเนิด
• ตัวแปรก่อนการวิเคราะห์ (การตรึง, การประมวลผล)
• การตรวจสอบความถูกต้องของแอนติบอดีบนพื้นผิวเซลล์วิทยา

Mechanisms

แอนติบอดีปฐมภูมิจะจับกับแอนติเจนเป้าหมายในการเตรียมเซลล์วิทยาที่ถูกตรึงไว้ จากนั้นแอนติบอดีที่จับอยู่จะถูกมองเห็นได้ผ่านระบบตรวจจับที่สะสมโครโมเจนหรือฟลูออโรฟอร์ที่มีสี ณ ตำแหน่งแอนติเจน เนื่องจากตัวอย่างทางเซลล์วิทยาถูกเตรียมในหลายวิธี เช่น สเมียร์ที่ผึ่งลมหรือตรึงด้วยแอลกอฮอล์, สื่อเหลว, ไซโตสปิน และเซลล์บล็อกที่ตรึงด้วยฟอร์มาลิน การคงสภาพของแอนติเจนและการย้อมสีพื้นหลังจึงแตกต่างกันไปตามพื้นผิว ดังนั้นแอนติบอดีที่ผ่านการตรวจสอบสำหรับเนื้อเยื่อวิทยาจึงไม่สามารถสันนิษฐานได้ว่าจะทำงานเหมือนกันในเซลล์วิทยา การแปลผลอาศัยรูปแบบและการกระจายตัวของการย้อมสีในแผงเครื่องหมายที่เลือกเพื่อแก้ไขความแตกต่างที่จำเพาะ มากกว่าผลบวกเพียงอย่างเดียว

Clinical relevance

อิมมูโนไซต์เคมีมีส่วนช่วยในการจำแนกประเภทเนื้องอก การกำหนดสายกำเนิด และการระบุตำแหน่งหลักที่เป็นไปได้ของโรคแพร่กระจายในตัวอย่างทางเซลล์วิทยา ในฐานะเนื้อหาอ้างอิง จะอธิบายถึงวิธีการสร้างและแปลผลข้อมูลอิมมูโนฟีโนไทป์ การเลือกแผงแอนติบอดีและการรายงานผลเป็นการตัดสินใจของห้องปฏิบัติการ ไม่ใช่คำแนะนำทางคลินิกเฉพาะบุคคล

Evidence & guidelines

การทบทวนอิมมูโนไซต์เคมีในวัสดุทางเซลล์วิทยาเน้นย้ำว่าผลลัพธ์ขึ้นอยู่กับการเตรียมและการตรวจสอบอย่างมาก และควรใช้เครื่องหมายเป็นแผงที่แปลผลในบริบททางสัณฐานวิทยา (Fetsch & Abati, 2001; Hirokawa et al., 2024) การตรวจสอบความถูกต้องจำเพาะต่อพื้นผิวถูกเน้นย้ำซ้ำๆ เนื่องจากประสิทธิภาพของแอนติบอดีอาจแตกต่างกันระหว่างส่วนตัดเนื้อเยื่อและสิ่งเตรียมทางเซลล์วิทยา

History

การระบุตำแหน่งด้วยแอนติบอดี ซึ่งพัฒนาขึ้นสำหรับส่วนตัดเนื้อเยื่อ ได้รับการปรับปรุงให้เข้ากับเซลล์วิทยาอย่างต่อเนื่องเมื่อเคมีในการตรวจจับและวิธีการคงสภาพแอนติเจนดีขึ้น เซลล์วิทยาของของเหลวในร่างกายเป็นสนามทดสอบที่สำคัญและมีอิทธิพลในช่วงแรก ซึ่งมีการรวบรวมแผงเพื่อแยกเซลล์มีโซทีเลียมที่เกิดปฏิกิริยาออกจากมะเร็งแพร่กระจาย ซึ่งเป็นปัญหาที่ Fetsch และ Abati (2001) ได้ทบทวนไว้อย่างละเอียด

Debates

แอนติบอดีที่ผ่านการตรวจสอบสำหรับเนื้อเยื่อวิทยา สามารถถ่ายทอดไปยังพื้นผิวเซลล์วิทยาได้มากน้อยเพียงใด?

เนื่องจากการตรึงและการเตรียมแตกต่างกันไปในสเมียร์, สื่อเหลว และเซลล์บล็อก ความไวและความจำเพาะของแอนติบอดีอาจไม่สามารถถ่ายทอดจากส่วนตัดเนื้อเยื่อได้ ดังนั้นจึงแนะนำให้มีการตรวจสอบความถูกต้องจำเพาะต่อพื้นผิวก่อนนำไปใช้ทางคลินิก

Seminal works

• fetsch-abati-2001

Frequently asked questions

อิมมูโนไซต์เคมีและอิมมูโนฮิสโตเคมีแตกต่างกันอย่างไร?

ทั้งสองวิธีใช้แอนติบอดีเพื่อระบุตำแหน่งแอนติเจน แต่อิมมูโนไซต์เคมีใช้กับการเตรียมเซลล์วิทยา เช่น สเมียร์, สไลด์แบบเหลว และเซลล์บล็อก ในขณะที่อิมมูโนฮิสโตเคมีใช้กับส่วนตัดของเนื้อเยื่อ; พื้นผิวที่แตกต่างกันต้องมีการตรวจสอบความถูกต้องแยกกัน

เหตุใดจึงใช้เครื่องหมายเป็นแผงแทนที่จะใช้เดี่ยวๆ?

ไม่มีเครื่องหมายใดที่จำเพาะอย่างสมบูรณ์ ดังนั้นแผงที่เลือกเพื่อแก้ไขความแตกต่างที่กำหนด และแปลผลร่วมกับการตรวจทางสัณฐานวิทยา จะให้โปรไฟล์อิมมูโนฟีโนไทป์ที่น่าเชื่อถือมากกว่าการย้อมสีแต่ละชนิด