Testes Moleculares e Detecção de HPV em Espécimes Citológicos

Testes moleculares em espécimes citológicos aplicam ensaios baseados em ácidos nucleicos a células obtidas por esfoliação ou aspiração, detectando alvos de DNA ou RNA que revelam infecção, mutações ou outras alterações clinicamente relevantes. A detecção do papilomavírus humano (HPV) de alto risco em amostras de citologia cervical é o exemplo mais difundido, enquanto o sequenciamento de aspirados por agulha fina estende o diagnóstico molecular a tumores sólidos.

Definition

O teste molecular em espécimes citológicos é a aplicação de ensaios baseados em ácidos nucleicos – incluindo a detecção de ácidos nucleicos virais e o perfil de mutação tumoral – a células obtidas por citologia esfoliativa ou por aspiração ou ao seu material residual de base líquida.

Scope

A entrada abrange o uso de material citológico e residual de base líquida como fonte de ácidos nucleicos, a detecção de HPV no rastreamento cervical e ensaios moleculares mais amplos, como o sequenciamento de próxima geração em aspirados. É uma visão geral metodológica e de referência e não fornece protocolos de rastreamento ou orientação de tratamento.

Core questions

• Quais fatores pré-analíticos determinam se o material citológico produz ácido nucleico adequado para teste?
• Como a detecção de HPV de alto risco complementa a citologia cervical morfológica no rastreamento?
• Quais ensaios moleculares podem ser realizados em aspirado por agulha fina e material citológico residual?

Key concepts

• Extração de ácido nucleico de material citológico
• Detecção de HPV de alto risco
• Citologia de base líquida como substrato molecular
• Estratégias de reflexo e co-teste
• Sequenciamento de próxima geração em aspirados
• Adequação da amostra para ensaios moleculares

Mechanisms

Amostras citológicas, particularmente preparações de base líquida, retêm células e fluido residual dos quais DNA e RNA podem ser extraídos; esses ácidos nucleicos são então interrogados por ensaios de amplificação, hibridização ou sequenciamento. Em aplicações cervicais, os ensaios detectam o DNA ou RNA de tipos de HPV de alto risco cuja infecção persistente subjaz à carcinogênese cervical, e tal teste pode ser combinado ou substituído pela citologia morfológica. Na citologia de tumores sólidos, o material aspirado por agulha fina pode fornecer ácido nucleico suficiente para sequenciamento direcionado ou de próxima geração para identificar alterações diagnostica ou terapeuticamente relevantes.

Clinical relevance

O teste molecular transforma uma amostra citológica em uma fonte de informação genômica e viral usada na classificação, estratificação de risco e relatório de biomarcadores; a detecção de HPV, em particular, remodelou os paradigmas de rastreamento cervical. Esta entrada descreve como tal teste é realizado; algoritmos de rastreamento específicos e decisões baseadas em biomarcadores são questões clínicas e não são conselhos individualizados aqui.

Epidemiology

A infecção persistente por tipos de HPV de alto risco é a causa necessária de quase todos os cânceres cervicais, o que torna a detecção de ácido nucleico viral em espécimes de citologia cervical um alvo de rastreamento biologicamente fundamentado (Schiffman et al., 2007).

Evidence & guidelines

Evidências de rastreamento randomizado, incluindo resultados finais do estudo ATHENA, avaliaram o teste primário de HPV como uma estratégia de rastreamento cervical de primeira linha em comparação com abordagens baseadas em citologia (Wright et al., 2015). Para tumores sólidos, estudos mostraram que o sequenciamento de próxima geração pode ser realizado em espécimes de citologia de aspirado por agulha fina para obter diagnósticos moleculares (Qiu et al., 2015).

History

A descoberta de que o HPV de alto risco é a causa necessária do câncer cervical transformou a citologia cervical de um rastreamento puramente morfológico em um cenário para co-testes moleculares e, posteriormente, rastreamento primário de HPV. Em paralelo, o crescimento da terapia direcionada ao câncer impulsionou a adaptação de ensaios moleculares e de sequenciamento para as pequenas amostras produzidas pela aspiração por agulha fina.

Debates

O teste primário de HPV deve substituir o rastreamento cervical baseado em citologia?

Ensaios como o ATHENA apoiam o teste primário de HPV como um rastreamento de primeira linha, mas a combinação ideal de teste de HPV, citologia e triagem continua a ser debatida e varia entre os programas de rastreamento.

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

Os testes moleculares podem ser realizados na mesma amostra usada para citologia?

Frequentemente sim; preparações de citologia de base líquida retêm células e fluido residuais dos quais os ácidos nucleicos podem ser extraídos, permitindo a detecção de HPV ou outros ensaios moleculares na mesma amostra.

Por que o teste de HPV é usado no rastreamento do câncer cervical?

A infecção persistente por tipos de HPV de alto risco é a causa necessária de quase todos os cânceres cervicais, então a detecção de ácido nucleico viral identifica a população em risco e complementa ou, em alguns programas, precede a citologia morfológica.