Hibridização Fluorescente In Situ (FISH) em Citologia

A hibridização fluorescente in situ (FISH) utiliza sondas de DNA marcadas fluorescentemente que se ligam a sequências complementares em núcleos celulares, tornando regiões cromossômicas ou genes específicos visíveis sob um microscópio de fluorescência. Aplicada a espécimes citológicos, pode detectar aneuploidia, amplificações genéticas, deleções e rearranjos diretamente em células intactas, adicionando uma dimensão citogenética à avaliação morfológica.

Definition

FISH é uma técnica citogenética auxiliar na qual sondas de ácido nucleico marcadas fluorescentemente hibridizam-se a alvos de DNA específicos dentro das células em uma preparação citológica, permitindo a visualização de alterações no número de cópias cromossômicas e rearranjos estruturais.

Scope

A entrada aborda o princípio da hibridização de sondas em preparações citológicas, os tipos de anormalidades genômicas que o FISH pode resolver e suas aplicações citológicas estabelecidas, como ensaios multitarget em espécimes urinários e brônquicos. É uma referência metodológica e não fornece protocolos de teste ou interpretação.

Core questions

• Quais anormalidades cromossômicas ou em nível genético o FISH pode resolver em um determinado espécime citológico?
• Como o design da sonda e os critérios de enumeração de sinais determinam um resultado positivo?
• Como o FISH complementa a morfologia citológica em amostras equívocas ou atípicas?

Key concepts

• Hibridização de sonda sequência-específica
• Sondas centroméricas, locus-específicas e break-apart
• Detecção de aneuploidia e número de cópias
• Painéis de sondas multitarget (por exemplo, UroVysion)
• Enumeração de sinais e limiares de pontuação
• Aplicação em células intactas em lâminas

Mechanisms

O DNA da sonda de fita simples desnaturado, transportado por um fluoróforo, anela-se à sua sequência-alvo complementar dentro do DNA nuclear desnaturado de células fixadas em uma lâmina; após a lavagem da sonda não ligada, os sinais ligados são contados sob microscopia de fluorescência. Sondas centroméricas relatam o número de cópias cromossômicas, sondas específicas de locus detectam amplificação ou deleção de uma região, e sondas dual-color break-apart revelam rearranjos pela separação de sinais pareados. Painéis multitarget combinam várias sondas para que padrões de aneuploidia característicos de malignidade possam ser reconhecidos em células que parecem morfologicamente ambíguas.

Clinical relevance

O FISH adiciona informações citogenéticas objetivas à citologia, por exemplo, ajudando a avaliar amostras uroteliais atípicas ou a avaliar a citologia pulmonar, e é usado como um adjunto em vez de um substituto para a revisão morfológica. Esta entrada descreve como o método gera informações; a seleção e interpretação específicas do ensaio são decisões laboratoriais e clínicas e não são conselhos individualizados.

Evidence & guidelines

Estudos de amostras pareadas do ensaio multitarget UroVysion em urina coletada compararam seu desempenho com a citologia convencional para detectar carcinoma urotelial, relatando pontos fortes e limitações complementares (Lavery et al., 2017; Dimashkieh et al., 2013). O FISH multitarget também foi avaliado em espécimes de citologia brônquica para a detecção de câncer de pulmão (Zhai et al., 2015).

History

A hibridização in situ foi desenvolvida pela primeira vez para preparações de tecidos e cromossomos; a substituição de marcadores radioativos por fluorescentes tornou os ensaios multicoloridos e com múltiplas sondas práticos e permitiu que a técnica fosse aplicada diretamente a lâminas citológicas. Os painéis urinários multitarget tornaram-se uma das aplicações citológicas mais amplamente estudadas.

Debates

Como o FISH e a citologia convencional devem ser combinados em amostras urinárias atípicas?

Estudos mostram que o FISH e a citologia têm sensibilidade e especificidade complementares, levantando a questão de saber se o FISH é melhor usado como um teste reflexo, um adjunto à morfologia ou uma ferramenta de triagem, sem uma única abordagem universalmente adotada.

Seminal works

• dimashkieh-2013
• lavery-2017

Frequently asked questions

Que tipos de anormalidades o FISH pode detectar em amostras citológicas?

O FISH pode revelar aneuploidia cromossômica, amplificações e deleções genéticas, e rearranjos estruturais, contando os sinais de sondas fluorescentes em núcleos celulares individuais na lâmina.

O FISH substitui a citologia convencional?

Não; é usado como um adjunto. O FISH e a citologia morfológica têm pontos fortes complementares, e o FISH adiciona informações citogenéticas em vez de substituir a avaliação visual das células.