Técnicas Auxiliares e Métodos Moleculares em Citopatologia
Técnicas auxiliares são os métodos laboratoriais aplicados a material citológico após o exame de esfregaços corados rotineiramente por Papanicolaou e Romanowsky, a fim de refinar uma impressão morfológica, classificar um tumor ou detectar uma alteração clinicamente acionável. Elas expandem o alcance da citologia além da morfologia, permitindo que pequenas amostras, como aspirados por agulha fina, derrames e preparações esfoliativas, forneçam informações imunofenotípicas, citogenéticas e moleculares.
Definition
Técnicas auxiliares em citopatologia são estudos laboratoriais adjuntos realizados em preparações citológicas ou material celular residual para complementar o diagnóstico morfológico, compreendendo métodos imunofenotípicos, citogenéticos, moleculares e computacionais.
Scope
Esta área orienta o leitor sobre os principais métodos adjuntos utilizados em espécimes citológicos: imuno-histoquímica para marcadores proteicos, hibridização fluorescente in situ para alterações cromossômicas e em nível genético, citometria de fluxo para imunofenotipagem de suspensões celulares, testes moleculares e de papilomavírus humano em material citológico, e patologia digital com análise automatizada de imagens. É uma visão geral estrutural; cada técnica é tratada em detalhe em seu próprio nó de tópico.
Sub-topics
Core questions
- Qual método auxiliar é apropriado para um determinado espécime citológico e questão diagnóstica?
- Como a preparação e fixação do espécime afetam a validade dos resultados imunocitoquímicos, FISH e moleculares?
- Como o material citológico limitado pode ser triado para que os estudos morfológicos e auxiliares sejam ambos preservados?
Key concepts
- Adequação e triagem do espécime
- Preparação do bloco celular
- Imunofenotipagem
- Validação e fatores pré-analíticos
- Testes reflexos e adjuntos
- Fluxos de trabalho que economizam amostras
Mechanisms
Amostras citológicas podem ser processadas como esfregaços diretos, preparações em base líquida, citocentrífugas ou blocos celulares; a preparação escolhida determina quais métodos auxiliares são viáveis. A imuno-histoquímica localiza antígenos proteicos com anticorpos marcados, a hibridização fluorescente in situ visualiza sequências específicas de DNA com sondas fluorescentes, a citometria de fluxo mede a expressão de antígenos em células em suspensão, e os ensaios moleculares extraem e interrogam ácidos nucleicos. Como o material citológico é frequentemente escasso, um tema recorrente é a triagem da amostra para que a morfologia e um ou mais estudos adjuntos possam ser realizados.
Clinical relevance
As técnicas auxiliares ampliam o que uma amostra citológica pode responder, apoiando a classificação tumoral, a atribuição de linhagem e a detecção de biomarcadores que são relatados juntamente com a morfologia. Como material de referência, esta área descreve como tais informações são geradas; a seleção e interpretação de testes específicos são decisões de laboratório clínico e não são conselhos individualizados aqui.
Evidence & guidelines
Órgãos profissionais emitiram estruturas de validação e relatórios relevantes para esses métodos, incluindo a diretriz do College of American Pathologists sobre a validação de imagens de lâminas inteiras para uso diagnóstico (Pantanowitz et al., 2013). Evidências específicas de métodos, como o sequenciamento de próxima geração realizado diretamente em material de aspirado por agulha fina (Qiu et al., 2015), são resumidas nos nós de tópico correspondentes.
History
A citopatologia começou como uma disciplina puramente morfológica construída sobre a coloração de Papanicolaou. Nas décadas seguintes, a imuno-histoquímica, depois a hibridização in situ e a citometria de fluxo, e mais recentemente os testes moleculares baseados em ácidos nucleicos e a análise de imagem digital foram adaptados da histopatologia e da medicina laboratorial para as amostras menores e diferentemente preparadas encontradas na citologia.
Related topics
Seminal works
- fetsch-abati-2001
- pantanowitz-2013
Frequently asked questions
- Por que as técnicas auxiliares são especialmente importantes em citologia?
- Amostras citológicas são frequentemente pequenas e carecem de arquitetura, então métodos adjuntos que adicionam informações imunofenotípicas ou moleculares frequentemente permitem uma classificação definitiva que a morfologia sozinha não pode fornecer.
- O que é um bloco celular e por que ele é importante para testes auxiliares?
- Um bloco celular é uma preparação incluída em parafina feita a partir de material citológico residual; ele fornece cortes adequados para imuno-histoquímica, hibridização in situ e extração molecular, tornando-o um facilitador chave de estudos auxiliares em espécimes citológicos.