آزمایش مولکولی و تشخیص HPV در نمونه‌های سیتولوژیک

آزمایش مولکولی بر روی نمونه‌های سیتولوژیک، سنجش‌های مبتنی بر اسید نوکلئیک را بر روی سلول‌های به‌دست‌آمده از طریق لایه‌برداری یا آسپیراسیون اعمال می‌کند و اهداف DNA یا RNA را که نشان‌دهنده عفونت، جهش‌ها یا سایر تغییرات بالینی مرتبط هستند، شناسایی می‌کند. تشخیص ویروس پاپیلومای انسانی (HPV) پرخطر در نمونه‌های سیتولوژی دهانه رحم گسترده‌ترین مثال است، در حالی که توالی‌یابی آسپیراسیون با سوزن ظریف، تشخیص مولکولی را به تومورهای جامد گسترش می‌دهد.

Definition

آزمایش مولکولی بر روی نمونه‌های سیتولوژیک، کاربرد سنجش‌های مبتنی بر اسید نوکلئیک – شامل تشخیص اسید نوکلئیک ویروسی و پروفایل جهش تومور – بر روی سلول‌های به‌دست‌آمده از سیتولوژی لایه‌برداری یا آسپیراسیون یا بر روی مواد مایع باقیمانده آن‌ها است.

Scope

این مدخل به استفاده از مواد سیتولوژیک و مایع باقیمانده به عنوان منبع اسیدهای نوکلئیک، تشخیص HPV در غربالگری دهانه رحم، و سنجش‌های مولکولی گسترده‌تر مانند توالی‌یابی نسل بعدی بر روی آسپیراسیون‌ها می‌پردازد. این یک نمای کلی روش‌شناختی و مرجع است و پروتکل‌های غربالگری یا راهنمایی‌های درمانی را ارائه نمی‌دهد.

Core questions

• چه عوامل پیش‌تحلیلی تعیین می‌کنند که آیا مواد سیتولوژیک اسید نوکلئیک کافی برای آزمایش را تولید می‌کنند؟
• تشخیص HPV پرخطر چگونه سیتولوژی مورفولوژیک دهانه رحم را در غربالگری تکمیل می‌کند؟
• کدام سنجش‌های مولکولی را می‌توان بر روی آسپیراسیون با سوزن ظریف و مواد سیتولوژی باقیمانده انجام داد؟

Key concepts

• استخراج اسید نوکلئیک از مواد سیتولوژیک
• تشخیص HPV پرخطر
• سیتولوژی مبتنی بر مایع به عنوان یک بستر مولکولی
• استراتژی‌های رفلکس و هم‌سنجی
• توالی‌یابی نسل بعدی بر روی آسپیراسیون‌ها
• کفایت نمونه برای سنجش‌های مولکولی

Mechanisms

نمونه‌های سیتولوژیک، به‌ویژه آماده‌سازی‌های مبتنی بر مایع، سلول‌ها و مایع باقیمانده را حفظ می‌کنند که از آن‌ها می‌توان DNA و RNA را استخراج کرد؛ این اسیدهای نوکلئیک سپس با سنجش‌های تکثیر، هیبریداسیون یا توالی‌یابی مورد بررسی قرار می‌گیرند. در کاربردهای دهانه رحم، سنجش‌ها DNA یا RNA انواع HPV پرخطر را که عفونت پایدار آن‌ها زیربنای سرطان‌زایی دهانه رحم است، شناسایی می‌کنند، و چنین آزمایشی می‌تواند با سیتولوژی مورفولوژیک ترکیب یا جایگزین شود. در سیتولوژی تومور جامد، مواد آسپیراسیون با سوزن ظریف می‌توانند اسید نوکلئیک کافی برای توالی‌یابی هدفمند یا نسل بعدی را برای شناسایی تغییرات مرتبط با تشخیص یا درمان فراهم کنند.

Clinical relevance

آزمایش مولکولی یک نمونه سیتولوژیک را به منبعی از اطلاعات ژنومی و ویروسی تبدیل می‌کند که در طبقه‌بندی، طبقه‌بندی خطر، و گزارش‌دهی نشانگرهای زیستی استفاده می‌شود؛ به‌ویژه تشخیص HPV الگوهای غربالگری دهانه رحم را تغییر داده است. این مدخل نحوه انجام چنین آزمایشی را توضیح می‌دهد؛ الگوریتم‌های غربالگری خاص و تصمیمات مبتنی بر نشانگرهای زیستی مسائل بالینی هستند و در اینجا توصیه‌های فردی ارائه نمی‌شود.

Epidemiology

عفونت پایدار با انواع HPV پرخطر علت ضروری تقریباً تمام سرطان‌های دهانه رحم است، که تشخیص اسید نوکلئیک ویروسی را در نمونه‌های سیتولوژی دهانه رحم به یک هدف غربالگری با پایه بیولوژیکی تبدیل می‌کند (Schiffman et al., 2007).

Evidence & guidelines

شواهد غربالگری تصادفی، از جمله نتایج پایان مطالعه از مطالعه ATHENA، آزمایش اولیه HPV را به عنوان یک استراتژی غربالگری دهانه رحم خط اول در مقایسه با رویکردهای مبتنی بر سیتولوژی ارزیابی کرده است (Wright et al., 2015). برای تومورهای جامد، مطالعات نشان داده‌اند که توالی‌یابی نسل بعدی را می‌توان بر روی نمونه‌های سیتولوژی آسپیراسیون با سوزن ظریف برای به‌دست‌آوردن تشخیص‌های مولکولی انجام داد (Qiu et al., 2015).

History

کشف اینکه HPV پرخطر علت ضروری سرطان دهانه رحم است، سیتولوژی دهانه رحم را از یک غربالگری صرفاً مورفولوژیک به محیطی برای هم‌سنجی مولکولی و سپس غربالگری اولیه HPV تبدیل کرد. به موازات آن، رشد درمان هدفمند سرطان، تطبیق سنجش‌های مولکولی و توالی‌یابی را با نمونه‌های کوچک تولید شده توسط آسپیراسیون با سوزن ظریف به پیش برد.

Debates

آیا آزمایش اولیه HPV باید جایگزین غربالگری دهانه رحم مبتنی بر سیتولوژی شود؟

آزمایش‌هایی مانند ATHENA از آزمایش اولیه HPV به عنوان یک غربالگری خط اول حمایت می‌کنند، اما ترکیب بهینه آزمایش HPV، سیتولوژی و تریاژ همچنان مورد بحث است و در برنامه‌های غربالگری مختلف متفاوت است.

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

آیا می‌توان آزمایش‌های مولکولی را بر روی همان نمونه‌ای که برای سیتولوژی استفاده می‌شود، انجام داد؟

اغلب بله؛ آماده‌سازی‌های سیتولوژی مبتنی بر مایع، سلول‌ها و مایعات باقیمانده را حفظ می‌کنند که از آن‌ها می‌توان اسیدهای نوکلئیک را استخراج کرد و امکان تشخیص HPV یا سایر سنجش‌های مولکولی را بر روی همان نمونه فراهم می‌کند.

چرا آزمایش HPV در غربالگری سرطان دهانه رحم استفاده می‌شود؟

عفونت پایدار با انواع HPV پرخطر علت ضروری تقریباً تمام سرطان‌های دهانه رحم است، بنابراین تشخیص اسید نوکلئیک ویروسی، جمعیت در معرض خطر را شناسایی می‌کند و سیتولوژی مورفولوژیک را تکمیل می‌کند یا در برخی برنامه‌ها، پیش از آن قرار می‌گیرد.