تکنیکهای کمکی و روشهای مولکولی در سیتوپاتولوژی
تکنیکهای کمکی، روشهای آزمایشگاهی هستند که پس از بررسی اسمیرهای روتین رنگآمیزیشده با پاپانیکولائو و رومانوفسکی، بر روی مواد سیتولوژیک اعمال میشوند تا برداشت مورفولوژیک را دقیقتر کنند، تومور را طبقهبندی کنند یا تغییرات قابل درمان بالینی را شناسایی کنند. این تکنیکها دامنه سیتولوژی را فراتر از صرفاً مورفولوژی گسترش میدهند و به نمونههای کوچک مانند آسپیراسیون با سوزن ظریف، افیوژنها و آمادهسازیهای لایهبرداری اجازه میدهند تا اطلاعات ایمونوفنوتیپی، سیتوژنتیکی و مولکولی را ارائه دهند.
Definition
تکنیکهای کمکی در سیتوپاتولوژی، مطالعات آزمایشگاهی کمکی هستند که بر روی آمادهسازیهای سیتولوژیک یا مواد سلولی باقیمانده برای تکمیل تشخیص مورفولوژیک انجام میشوند و شامل روشهای ایمونوفنوتیپی، سیتوژنتیکی، مولکولی و محاسباتی هستند.
Scope
این بخش خواننده را با روشهای اصلی کمکی مورد استفاده در نمونههای سیتولوژیک آشنا میکند: ایمونوسیتوشیمی برای نشانگرهای پروتئینی، هیبریداسیون فلورسنت درجا برای تغییرات کروموزومی و در سطح ژن، فلوسیتومتری برای ایمونوفنوتایپینگ سوسپانسیونهای سلولی، آزمایشهای مولکولی و ویروس پاپیلومای انسانی بر روی مواد سیتولوژی، و پاتولوژی دیجیتال با تجزیه و تحلیل خودکار تصویر. این یک نمای کلی ساختاری است؛ هر تکنیک به تفصیل در گره موضوعی خود مورد بررسی قرار میگیرد.
Sub-topics
Core questions
- کدام روش کمکی برای یک نمونه سیتولوژیک و سؤال تشخیصی معین مناسب است؟
- چگونه آمادهسازی و تثبیت نمونه بر اعتبار نتایج ایمونوسیتوشیمی، FISH و مولکولی تأثیر میگذارد؟
- چگونه میتوان مواد سیتولوژیک محدود را اولویتبندی کرد تا مطالعات مورفولوژیک و کمکی هر دو حفظ شوند؟
Key concepts
- کفایت و اولویتبندی نمونه
- آمادهسازی بلوک سلولی
- ایمونوفنوتایپینگ
- اعتبارسنجی و عوامل پیشتحلیلی
- آزمایشهای رفلکس و کمکی
- گردش کار صرفهجویی در نمونه
Mechanisms
نمونههای سیتولوژیک را میتوان به صورت اسمیرهای مستقیم، آمادهسازیهای مبتنی بر مایع، سیتواسپینها یا بلوکهای سلولی پردازش کرد؛ آمادهسازی انتخابی تعیین میکند که کدام روشهای کمکی قابل انجام هستند. ایمونوسیتوشیمی آنتیژنهای پروتئینی را با آنتیبادیهای نشاندار موضعی میکند، هیبریداسیون فلورسنت درجا توالیهای DNA خاص را با پروبهای فلورسنت تجسم میکند، فلوسیتومتری بیان آنتیژن را بر روی سلولهای در سوسپانسیون اندازهگیری میکند، و سنجشهای مولکولی اسیدهای نوکلئیک را استخراج و بررسی میکنند. از آنجایی که مواد سیتولوژیک اغلب کمیاب هستند، یک موضوع تکراری، اولویتبندی نمونه است تا مورفولوژی و یک یا چند مطالعه کمکی هر دو قابل انجام باشند.
Clinical relevance
تکنیکهای کمکی دامنه پاسخهایی را که یک نمونه سیتولوژیک میتواند ارائه دهد، گسترش میدهند و از طبقهبندی تومور، تعیین رده سلولی و شناسایی بیومارکرها که در کنار مورفولوژی گزارش میشوند، حمایت میکنند. به عنوان یک منبع مرجع، این بخش نحوه تولید چنین اطلاعاتی را توضیح میدهد؛ انتخاب و تفسیر آزمایشهای خاص، تصمیمات آزمایشگاه بالینی هستند و در اینجا مشاوره فردی ارائه نمیشود.
Evidence & guidelines
نهادهای حرفهای چارچوبهای اعتبارسنجی و گزارشدهی مرتبط با این روشها را صادر کردهاند، از جمله دستورالعمل کالج آسیبشناسان آمریکا در مورد اعتبارسنجی تصویربرداری تمام اسلاید برای استفاده تشخیصی (Pantanowitz و همکاران، 2013). شواهد خاص روش، مانند توالییابی نسل بعدی که مستقیماً بر روی مواد آسپیراسیون با سوزن ظریف انجام میشود (Qiu و همکاران، 2015)، در گرههای موضوعی مربوطه خلاصه شده است.
History
سیتوپاتولوژی به عنوان یک رشته صرفاً مورفولوژیک بر پایه رنگآمیزی پاپانیکولائو آغاز شد. در دهههای بعدی، ایمونوسیتوشیمی، سپس هیبریداسیون درجا و فلوسیتومتری، و اخیراً آزمایشهای مولکولی مبتنی بر اسید نوکلئیک و تجزیه و تحلیل تصویر دیجیتال از هیستوپاتولوژی و پزشکی آزمایشگاهی به نمونههای کوچکتر و متفاوت آمادهشده در سیتولوژی تطبیق داده شدند.
Related topics
Seminal works
- fetsch-abati-2001
- pantanowitz-2013
Frequently asked questions
- چرا تکنیکهای کمکی در سیتولوژی اهمیت ویژهای دارند؟
- نمونههای سیتولوژیک اغلب کوچک هستند و فاقد ساختار میباشند، بنابراین روشهای کمکی که اطلاعات ایمونوفنوتیپی یا مولکولی اضافه میکنند، اغلب امکان طبقهبندی قطعی را فراهم میآورند که مورفولوژی به تنهایی نمیتواند ارائه دهد.
- بلوک سلولی چیست و چرا برای آزمایشهای کمکی اهمیت دارد؟
- بلوک سلولی یک آمادهسازی پارافینگذاری شده است که از مواد سیتولوژیک باقیمانده تهیه میشود؛ این بلوک برشهایی را فراهم میکند که برای ایمونوسیتوشیمی، هیبریداسیون درجا و استخراج مولکولی مناسب هستند و آن را به یک عامل کلیدی برای مطالعات کمکی بر روی نمونههای سیتولوژی تبدیل میکند.