การนับจำนวนลิมโฟไซต์และการตรวจด้วยโฟลว์ไซโตเมทรีในการประเมินภูมิคุ้มกัน

ลิมโฟไซต์มีบทบาทสำคัญในการสร้างภูมิคุ้มกันแบบปรับตัว และจำนวนรวมของลิมโฟไซต์และองค์ประกอบของชนิดย่อยมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการประเมินสถานะภูมิคุ้มกัน โฟลว์ไซโตเมทรีเป็นวิธีการหลักทางห้องปฏิบัติการสำหรับการนับจำนวนลิมโฟไซต์และระบุชนิดย่อยโดยอาศัยเครื่องหมายที่เซลล์แสดงออก ทำให้เป็นเครื่องมือสำคัญในการประเมินภูมิคุ้มกันและการจำแนกลักษณะของโรคเกี่ยวกับระบบน้ำเหลือง

Definition

การนับจำนวนลิมโฟไซต์คือการวัดเชิงปริมาณของลิมโฟไซต์และชนิดย่อยของลิมโฟไซต์ ส่วนโฟลว์ไซโตเมทรีเป็นเทคนิคที่ใช้วัดคุณสมบัติทางกายภาพและคุณสมบัติการเรืองแสงของเซลล์ที่แขวนลอย เพื่อระบุและนับจำนวนประชากรเซลล์ตามชนิดภูมิคุ้มกันของเซลล์นั้นๆ

Scope

หัวข้อนี้ครอบคลุมการนับจำนวนลิมโฟไซต์และการจำแนกชนิดภูมิคุ้มกันด้วยโฟลว์ไซโตเมทรี: การวัดจำนวนลิมโฟไซต์ทั้งหมดและชนิดย่อย (เช่น ทีเซลล์, บีเซลล์ และเซลล์เพชฌฆาตธรรมชาติ), การใช้จำนวนซีดี4 ทีเซลล์เป็นดัชนีของสถานะภูมิคุ้มกัน และบทบาทของแผงแอนติบอดีมาตรฐานในการจำแนกลักษณะของประชากรเซลล์น้ำเหลืองที่มีปฏิกิริยาตอบสนองและเซลล์มะเร็ง เป็นคำอธิบายอ้างอิงของวิธีการและการประยุกต์ใช้ ไม่ใช่คำแนะนำทางคลินิกหรือการตีความสำหรับบุคคลใดบุคคลหนึ่ง

Core questions

• โฟลว์ไซโตเมทรีระบุและนับจำนวนชนิดย่อยของลิมโฟไซต์ได้อย่างไร?
• จำนวนซีดี4 ทีเซลล์แสดงถึงอะไร และวัดได้อย่างน่าเชื่อถือได้อย่างไร?
• แผงแอนติบอดีมาตรฐานช่วยปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำของการจำแนกชนิดภูมิคุ้มกันได้อย่างไร?
• โฟลว์ไซโตเมทรีใช้ในการแยกความแตกต่างระหว่างประชากรเซลล์น้ำเหลืองที่มีปฏิกิริยาตอบสนองกับเซลล์มะเร็งได้อย่างไร?

Key concepts

• หลักการของโฟลว์ไซโตเมทรี (การกระเจิงแสงและการเรืองแสง)
• การจำแนกชนิดภูมิคุ้มกันและเครื่องหมายซีดี
• ชนิดย่อยของลิมโฟไซต์ (ทีเซลล์, บีเซลล์, เซลล์เพชฌฆาตธรรมชาติ)
• การนับจำนวนซีดี4 ทีเซลล์
• การนับแบบแพลตฟอร์มเดียวเทียบกับสองแพลตฟอร์ม
• กลยุทธ์การคัดแยก (Gating strategy)
• แผงแอนติบอดีมาตรฐาน (EuroFlow)
• การประเมินความเป็นโคลน

Mechanisms

ในการตรวจด้วยโฟลว์ไซโตเมทรี เซลล์ที่แขวนลอยจะเคลื่อนที่ผ่านลำแสงเลเซอร์หนึ่งลำหรือมากกว่านั้นทีละเซลล์ การกระเจิงแสงไปข้างหน้าและด้านข้างจะบ่งบอกถึงขนาดและความซับซ้อนของเซลล์ ในขณะที่แอนติบอดีที่ติดสารเรืองแสงซึ่งจับกับแอนติเจนบนพื้นผิวเซลล์หรือภายในเซลล์จะบ่งบอกถึงเครื่องหมายที่เซลล์นั้นแสดงออก ด้วยการรวมเครื่องหมายต่างๆ และการใช้กลยุทธ์การคัดแยก (gating strategy) ประชากรเซลล์ต่างๆ เช่น ซีดี4 และซีดี8 ทีเซลล์, บีเซลล์ และเซลล์เพชฌฆาตธรรมชาติ จะถูกระบุและนับจำนวน (Maecker 2015) การนับจำนวนสามารถทำได้บนแพลตฟอร์มเดียว (จำนวนเซลล์ต่อปริมาตรโดยตรง) หรือโดยการรวมเปอร์เซ็นต์เข้ากับการนับจำนวนเซลล์แยกต่างหาก โดยทั่วไปแล้ว วิธีการแพลตฟอร์มเดียวมักเป็นที่นิยมมากกว่าเพื่อความแม่นยำในการนับจำนวนซีดี4 (Whitby 2013) แผงแอนติบอดีที่ได้มาตรฐานและผ่านการตรวจสอบความถูกต้อง เช่น แผง EuroFlow ทำให้การจำแนกชนิดภูมิคุ้มกันสามารถทำซ้ำได้ในห้องปฏิบัติการต่างๆ และสนับสนุนการรับรู้ประชากรเซลล์น้ำเหลืองที่ผิดปกติหรือเป็นโคลน ซึ่งนำไปสู่การจำแนกประเภทของเนื้องอกต่อมน้ำเหลือง (van Dongen 2012; Swerdlow 2016)

Clinical relevance

การนับจำนวนลิมโฟไซต์เป็นพื้นฐานของการประเมินสถานะภูมิคุ้มกัน เช่น จำนวนซีดี4 ทีเซลล์เป็นดัชนีที่ใช้มานานในบริบทของการติดเชื้อเอชไอวี และการจำแนกชนิดภูมิคุ้มกันเป็นส่วนสำคัญในการจำแนกลักษณะของความผิดปกติของเซลล์น้ำเหลืองที่เพิ่มจำนวนผิดปกติ (lymphoproliferative disorders) และภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่อง บทความนี้อธิบายวิธีการทำงานและสิ่งที่วัดได้ในระดับประชากรและระดับห้องปฏิบัติการ ไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการวินิจฉัย การจัดระยะ หรือการรักษาสำหรับแต่ละบุคคล

Evidence & guidelines

การจำแนกชนิดภูมิคุ้มกันที่สามารถทำซ้ำได้นั้นอาศัยแผงแอนติบอดีมาตรฐาน (van Dongen 2012) และแนวทางที่เป็นเอกฉันท์เกี่ยวกับการตรวจด้วยโฟลว์ไซโตเมทรีและแมสไซโตเมทรีสำหรับการติดตามภูมิคุ้มกัน (Maecker 2015) การศึกษาทางระเบียบวิธีวิจัยได้กำหนดขีดจำกัดการวัดของการนับจำนวนซีดี4 และข้อดีของการนับแบบแพลตฟอร์มเดียว (Whitby 2013) และหมวดหมู่ทางภูมิคุ้มกันวิทยาได้ถูกนำไปใช้ในการจำแนกประเภทเนื้องอกต่อมน้ำเหลืองขององค์การอนามัยโลก (Swerdlow 2016)

Debates

การนับจำนวนซีดี4 แบบแพลตฟอร์มเดียวเทียบกับสองแพลตฟอร์ม

วิธีการแบบแพลตฟอร์มเดียวได้ค่าจำนวนสัมบูรณ์โดยตรงและโดยทั่วไปแสดงข้อผิดพลาดที่ต่ำกว่าวิธีการแบบสองแพลตฟอร์มที่รวมเปอร์เซ็นต์เข้ากับการนับจำนวนเซลล์แยกต่างหาก ซึ่งมีอิทธิพลต่อแนวทางปฏิบัติที่แนะนำสำหรับการนับจำนวนซีดี4

Seminal works

• vandongen-2012
• maecker-2015
• swerdlow-2016

Frequently asked questions

การนับซีดี4 วัดอะไร?

การนับซีดี4 วัดจำนวนลิมโฟไซต์ชนิดทีที่แสดงเครื่องหมายซีดี4 โดยทั่วไปต่อไมโครลิตรของเลือด ซึ่งใช้เป็นดัชนีของสถานะภูมิคุ้มกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่งในบริบทของการติดเชื้อเอชไอวี

โฟลว์ไซโตเมทรีแยกชนิดของลิมโฟไซต์ได้อย่างไร?

แอนติบอดีที่ติดสารเรืองแสงจะจับกับเครื่องหมายเฉพาะบนพื้นผิวเซลล์ และเครื่องไซโตมิเตอร์จะตรวจจับว่าเซลล์แต่ละเซลล์มีเครื่องหมายใดบ้าง ทำให้สามารถแยกแยะและนับจำนวนประชากรเซลล์ต่างๆ เช่น ทีเซลล์, บีเซลล์ และเซลล์เพชฌฆาตธรรมชาติได้