โฟลว์ไซโตเมทรีในการตรวจวินิจฉัยทางเซลล์วิทยา

โฟลว์ไซโตเมทรีเป็นการวัดคุณสมบัติทางกายภาพและแอนติเจนของเซลล์แต่ละเซลล์ขณะที่เซลล์เคลื่อนที่เรียงเดี่ยวผ่านลำแสงเลเซอร์ ซึ่งสร้างข้อมูลอิมมูโนฟีโนไทป์เชิงปริมาณของสารแขวนลอยเซลล์ เมื่อนำมาใช้กับวัสดุทางเซลล์วิทยา เช่น การดูดด้วยเข็มละเอียดและของเหลวในช่องว่างต่างๆ จะช่วยให้สามารถระบุลักษณะของเซลล์ที่มีอยู่ได้อย่างรวดเร็ว และมีคุณค่าอย่างยิ่งในการตรวจวินิจฉัยการเพิ่มจำนวนของเซลล์เม็ดเลือดขาวชนิดลิมฟอยด์

Definition

โฟลว์ไซโตเมทรีในเซลล์วิทยาคือการใช้อิมมูโนฟีโนไทปิงด้วยโฟลว์ไซโตเมทรีแบบหลายพารามิเตอร์กับสารแขวนลอยเซลล์เดี่ยวที่เตรียมจากสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยา เพื่อระบุลักษณะประชากรเซลล์และสนับสนุนการวินิจฉัย โดยเฉพาะอย่างยิ่งรอยโรคของระบบเลือดและน้ำเหลือง

Scope

เนื้อหานี้ครอบคลุมการเตรียมตัวอย่างทางเซลล์วิทยาให้เป็นสารแขวนลอยเซลล์เดี่ยว หลักการของอิมมูโนฟีโนไทปิงแบบหลายพารามิเตอร์ และบทบาทของโฟลว์ไซโตเมทรีควบคู่ไปกับการตรวจทางสัณฐานวิทยาและวิธีการเสริมอื่นๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับมะเร็งต่อมน้ำเหลือง เป็นข้อมูลอ้างอิงทางระเบียบวิธีวิจัย ไม่ใช่ระเบียบวิธีวินิจฉัย

Core questions

• ตัวอย่างทางเซลล์วิทยาจะถูกเปลี่ยนเป็นสารแขวนลอยที่เหมาะสมสำหรับโฟลว์ไซโตเมทรีได้อย่างไร?
• คุณสมบัติทางอิมมูโนฟีโนไทป์ใดบ้างที่ช่วยแยกแยะประชากรเซลล์ลิมฟอยด์ที่ตอบสนองจากการเพิ่มจำนวนแบบโคลน?
• โฟลว์ไซโตเมทรีเสริมการตรวจทางสัณฐานวิทยาและการตัดชิ้นเนื้อในการตรวจวินิจฉัยมะเร็งต่อมน้ำเหลืองได้อย่างไร?

Key concepts

• การเตรียมสารแขวนลอยเซลล์เดี่ยว
• การทำอิมมูโนฟีโนไทปิงแบบหลายพารามิเตอร์
• การวัดการกระเจิงของแสงและการเรืองแสง
• การประเมินความเป็นโคลนในประชากรเซลล์ลิมฟอยด์
• การคัดแยกสิ่งดูดอย่างรวดเร็ว ณ จุดตรวจ
• การเสริมซึ่งกันและกันกับสัณฐานวิทยา

Mechanisms

เซลล์จากสิ่งดูดหรือของเหลวในช่องว่างจะถูกกระจายในสารแขวนลอยที่เป็นของเหลว ติดฉลากด้วยแอนติบอดีที่ติดสารเรืองแสงหลายชนิด และไหลทีละเซลล์ผ่านลำแสงเลเซอร์หนึ่งลำหรือมากกว่านั้น; เครื่องตรวจจับจะบันทึกการกระเจิงของแสงไปข้างหน้าและด้านข้าง ซึ่งสะท้อนขนาดและความซับซ้อนของเซลล์ พร้อมกับการเรืองแสงของแอนติบอดีที่จับอยู่ มีการวัดเซลล์หลายพันเซลล์อย่างรวดเร็ว ทำให้เกิดอิมมูโนฟีโนไทป์แบบหลายพารามิเตอร์ ซึ่งสามารถระบุประชากรเซลล์ที่ผิดปกติหรือโคลนได้ เช่น โดยการจำกัดสายโซ่เบา (light-chain restriction) หรือการแสดงออกของแอนติเจนที่ผิดปกติในเซลล์ลิมฟอยด์ เนื่องจากวิธีนี้ต้องใช้เซลล์ที่มีชีวิตในสารแขวนลอย จึงเป็นการเสริม ไม่ใช่การทดแทนการประเมินทางสัณฐานวิทยาและโครงสร้าง

Clinical relevance

โฟลว์ไซโตเมทรีมีส่วนช่วยในการวินิจฉัยและการจำแนกประเภทย่อยของการเพิ่มจำนวนของเซลล์ลิมฟอยด์และเซลล์เม็ดเลือดอื่นๆ ที่เก็บตัวอย่างโดยเซลล์วิทยา และสามารถคัดแยกวัสดุที่ดูดออกมาเพื่อการทดสอบเพิ่มเติมได้ เนื้อหานี้อธิบายว่าเทคนิคนี้สร้างข้อมูลอิมมูโนฟีโนไทป์ได้อย่างไร การตีความการวินิจฉัยเฉพาะและการรวมผลลัพธ์ของโฟลว์ไซโตเมทรีเข้ากับสัณฐานวิทยาเป็นการตัดสินใจของห้องปฏิบัติการและทางคลินิก ไม่ใช่คำแนะนำเฉพาะบุคคล

Evidence & guidelines

โฟลว์ไซโตเมทรีได้รับการยอมรับอย่างดีว่าเป็นส่วนเสริมในการวินิจฉัยมะเร็งต่อมน้ำเหลืองด้วยการดูดด้วยเข็มละเอียด ซึ่งให้การทำอิมมูโนฟีโนไทป์อย่างรวดเร็วของเซลล์ที่ดูดออกมา (Skoog & Tani, 2009) การศึกษาเปรียบเทียบยังคงประเมินว่าการรวมการดูดด้วยเข็มละเอียดเข้ากับโฟลว์ไซโตเมทรี หรือการใช้วิธีการตัดชิ้นเนื้อด้วยเข็มแทน มีผลต่อผลการวินิจฉัยในมะเร็งต่อมน้ำเหลืองที่อยู่ลึกอย่างไร (Yang et al., 2023)

History

โฟลว์ไซโตเมทรีพัฒนาขึ้นในสาขาโลหิตวิทยาและภูมิคุ้มกันวิทยาในฐานะเครื่องมือสำหรับการนับและจำแนกชนิดของเซลล์เม็ดเลือดและไขกระดูก การปรับใช้กับเซลล์วิทยาจากการดูดด้วยเข็มละเอียดทำให้สามารถใช้วิธีการทำอิมมูโนฟีโนไทป์อย่างรวดเร็วแบบเดียวกันกับต่อมน้ำเหลืองและรอยโรคอื่นๆ ที่เก็บตัวอย่างโดยไม่ต้องผ่าตัด ทำให้เป็นส่วนเสริมมาตรฐานในเซลล์วิทยามะเร็งต่อมน้ำเหลือง

Debates

การดูดด้วยเข็มละเอียดร่วมกับโฟลว์ไซโตเมทรีควรมีความสมดุลกับการตัดชิ้นเนื้อด้วยเข็มหลักสำหรับการวินิจฉัยมะเร็งต่อมน้ำเหลืองอย่างไร?

การรวมการดูดด้วยเข็มละเอียดเข้ากับโฟลว์ไซโตเมทรีให้ข้อมูลอิมมูโนฟีโนไทป์ที่รวดเร็วและรุกรานน้อยที่สุด แต่การจำแนกประเภทย่อยที่ขึ้นอยู่กับโครงสร้างอาจยังคงต้องใช้เนื้อเยื่อ ดังนั้นกลยุทธ์การเก็บตัวอย่างที่เหมาะสมที่สุดสำหรับมะเร็งต่อมน้ำเหลืองที่อยู่ลึกยังคงเป็นที่ถกเถียงกัน

Seminal works

• skoog-tani-2009

Frequently asked questions

ตัวอย่างทางเซลล์วิทยาประเภทใดที่เหมาะสมสำหรับโฟลว์ไซโตเมทรี?

สิ่งส่งตรวจที่สามารถกระจายตัวเป็นสารแขวนลอยเซลล์เดี่ยวที่มีชีวิตได้ เช่น การดูดด้วยเข็มละเอียดจากต่อมน้ำเหลืองและของเหลวในช่องว่างต่างๆ เหมาะสม; เซลล์จะต้องยังคงมีชีวิตและไม่ถูกตรึงเพื่อการติดฉลากด้วยแอนติบอดี

เหตุใดโฟลว์ไซโตเมทรีจึงมีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับมะเร็งต่อมน้ำเหลือง?

สามารถวัดแอนติเจนจำนวนมากบนเซลล์แต่ละเซลล์จำนวนมากได้อย่างรวดเร็ว ทำให้สามารถตรวจจับประชากรเซลล์ลิมฟอยด์ที่เป็นโคลนหรือผิดปกติได้ เช่น ผ่านการจำกัดสายโซ่เบา ซึ่งสนับสนุนการวินิจฉัยและการจำแนกประเภทย่อยของมะเร็งต่อมน้ำเหลือง