Подсчет лимфоцитов и проточная цитометрия в оценке иммунного статуса

Лимфоциты осуществляют адаптивный иммунитет, и их количество, а также субпопуляционный состав имеют центральное значение для оценки иммунного статуса. Проточная цитометрия является основным лабораторным методом для подсчета лимфоцитов и идентификации их субпопуляций по экспрессируемым ими маркерам, что делает ее основным инструментом оценки иммунного статуса и характеристики лимфоидных заболеваний.

Definition

Подсчет лимфоцитов — это количественное измерение лимфоцитов и их субпопуляций; проточная цитометрия — это метод, который измеряет физические и флуоресцентные свойства клеток в суспензии для идентификации и подсчета популяций по их иммунофенотипу.

Scope

Эта тема охватывает подсчет лимфоцитов и иммунофенотипирование методом проточной цитометрии: измерение общего количества лимфоцитов и их субпопуляций (таких как Т-, В- и естественные киллерные клетки), использование подсчета CD4 Т-клеток в качестве показателя иммунного статуса, а также роль стандартизированных панелей антител в характеристике реактивных и неопластических лимфоидных популяций. Это справочное описание метода и его применений, а не клиническое руководство или интерпретация для конкретного человека.

Core questions

• Как проточная цитометрия идентифицирует и подсчитывает субпопуляции лимфоцитов?
• Что представляет собой количество CD4 Т-клеток и как его надежно измерить?
• Как стандартизированные панели антител повышают воспроизводимость иммунофенотипирования?
• Как проточная цитометрия используется для различения реактивных и неопластических лимфоидных популяций?

Key concepts

• Принципы проточной цитометрии (светорассеяние и флуоресценция)
• Иммунофенотипирование и CD-маркеры
• Субпопуляции лимфоцитов (Т-, В-, NK-клетки)
• Подсчет CD4 Т-клеток
• Одноплатформенный против двухплатформенного подсчета
• Стратегия гейтирования
• Стандартизированные панели антител (EuroFlow)
• Оценка клональности

Mechanisms

В проточной цитометрии клетки в суспензии проходят по одной через один или несколько лазерных лучей; прямое и боковое светорассеяние сообщает о размере и сложности клетки, в то время как конъюгированные с флуорохромами антитела, связанные с поверхностными или внутриклеточными антигенами, сообщают, какие маркеры экспрессирует клетка. Комбинируя маркеры и применяя стратегию гейтирования, идентифицируются и подсчитываются такие популяции, как CD4 и CD8 Т-клетки, В-клетки и естественные киллерные клетки (Maecker 2015). Подсчеты могут быть получены на одной платформе (клетки на объем напрямую) или путем объединения процентов с отдельным подсчетом клеток; подход с одной платформой обычно предпочтительнее для точности подсчета CD4 (Whitby 2013). Стандартизированные, валидированные панели антител, такие как панели EuroFlow, делают иммунофенотипирование воспроизводимым в разных лабораториях и способствуют распознаванию аберрантных или клональных лимфоидных популяций, что используется для классификации лимфоидных новообразований (van Dongen 2012; Swerdlow 2016).

Clinical relevance

Подсчет лимфоцитов лежит в основе оценки иммунного статуса — например, подсчет CD4 Т-клеток является давно установленным показателем в контексте ВИЧ-инфекции, — а иммунофенотипирование является неотъемлемой частью характеристики лимфопролиферативных заболеваний и иммунодефицитов. Эта статья объясняет, как работает метод и что он измеряет на популяционном и лабораторном уровне; она не является основой для индивидуальной диагностики, стадирования или лечения.

Evidence & guidelines

Воспроизводимое иммунофенотипирование обеспечивается стандартизированными панелями антител (van Dongen 2012) и консенсусными рекомендациями по проточной и масс-цитометрии для иммунного мониторинга (Maecker 2015). Методологические исследования определяют пределы измерения подсчета CD4 и преимущество подсчета на одной платформе (Whitby 2013), а иммунофенотипические категории используются в классификации лимфоидных новообразований Всемирной организации здравоохранения (Swerdlow 2016).

Debates

Одноплатформенный против двухплатформенного подсчета CD4

Одноплатформенные методы получают абсолютные значения напрямую и, как правило, демонстрируют меньшую погрешность, чем двухплатформенные подходы, которые объединяют процент с отдельным подсчетом клеток, что повлияло на рекомендуемую практику подсчета CD4.

Seminal works

• vandongen-2012
• maecker-2015
• swerdlow-2016

Frequently asked questions

Что измеряет количество CD4?

Количество CD4 измеряет число Т-лимфоцитов, экспрессирующих маркер CD4, обычно на микролитр крови; оно используется как показатель иммунного статуса, классически в условиях ВИЧ-инфекции.

Как проточная цитометрия различает типы лимфоцитов?

Антитела, меченные флуоресцентными красителями, связываются со специфическими поверхностными маркерами, и цитометр определяет, какие маркеры несет каждая клетка, что позволяет различать и подсчитывать такие популяции, как Т-клетки, В-клетки и естественные киллерные клетки.