Проточная цитометрия в цитопатологии

Проточная цитометрия измеряет физические и антигенные свойства отдельных клеток, когда они проходят поодиночке через лазерный луч, генерируя количественный иммунофенотип клеточной суспензии. При применении к цитологическому материалу, такому как аспираты тонкой иглой и выпоты, она быстро характеризует присутствующие клетки и особенно ценна при исследовании лимфоидных пролифераций.

Definition

Проточная цитометрия в цитопатологии — это использование многопараметрического проточно-цитометрического иммунофенотипирования на одноклеточных суспензиях, приготовленных из цитологических образцов, для характеристики клеточных популяций и поддержки диагностики, в частности гематолимфоидных поражений.

Scope

Статья охватывает подготовку цитологических образцов в виде одноклеточных суспензий, принцип многопараметрического иммунофенотипирования и роль проточной цитометрии наряду с морфологией и другими вспомогательными методами, особенно при лимфомах. Это методологический справочник, а не диагностический протокол.

Core questions

• Как цитологический образец преобразуется в суспензию, пригодную для проточной цитометрии?
• Какие иммунофенотипические признаки помогают отличить реактивные лимфоидные популяции от клональных?
• Как проточная цитометрия дополняет морфологию и биопсию тканей при исследовании лимфом?

Key concepts

• Приготовление одноклеточной суспензии
• Многопараметрическое иммунофенотипирование
• Измерение светорассеяния и флуоресценции
• Оценка клональности в лимфоидных популяциях
• Быстрая оценка аспиратов на месте
• Взаимодополняемость с морфологией

Mechanisms

Клетки из аспирата или выпота диспергируются в жидкой суспензии, метятся панелями антител, конъюгированных с флюорофорами, и пропускаются по одной через один или несколько лазерных лучей; детекторы регистрируют прямое и боковое светорассеяние, которое отражает размер и сложность клетки, а также флуоресценцию связанных антител. Тысячи клеток измеряются быстро, создавая многопараметрический иммунофенотип, в котором могут быть идентифицированы аномальные или клональные популяции — например, по ограничению легких цепей или аберрантной экспрессии антигенов в лимфоидных клетках. Поскольку метод требует жизнеспособных клеток в суспензии, он дополняет, а не заменяет морфологическую и архитектурную оценку.

Clinical relevance

Проточная цитометрия способствует диагностике и субклассификации лимфоидных и других гемопоэтических пролифераций, исследуемых цитологически, и может направлять аспирационный материал на дополнительные исследования. Эта статья описывает, как метод генерирует иммунофенотипические данные; специфическая диагностическая интерпретация и интеграция результатов проточной цитометрии с морфологией являются лабораторными и клиническими решениями, а не индивидуальными рекомендациями.

Evidence & guidelines

Проточная цитометрия хорошо зарекомендовала себя в качестве вспомогательного метода при тонкоигольной аспирационной диагностике лимфом, где она обеспечивает быстрое иммунофенотипирование аспирированных клеток (Skoog & Tani, 2009). Сравнительные исследования продолжают оценивать, как сочетание аспирации с проточной цитометрией или замена ее на методы биопсии иглой влияет на диагностическую эффективность при глубоко расположенных лимфомах (Yang et al., 2023).

History

Проточная цитометрия развивалась в гематологии и иммунологии как инструмент для подсчета и фенотипирования клеток крови и костного мозга. Ее адаптация к тонкоигольной аспирационной цитологии позволила применять то же быстрое иммунофенотипирование к лимфатическим узлам и другим поражениям, образцы которых были получены без иссечения, что сделало ее стандартным дополнением в цитологии лимфом.

Debates

Как следует соотносить аспирацию с проточной цитометрией и биопсию иглой для диагностики лимфомы?

Сочетание тонкоигольной аспирации с проточной цитометрией обеспечивает быстрое, минимально инвазивное иммунофенотипирование, но для субклассификации, зависящей от архитектуры, все еще может потребоваться ткань, поэтому оптимальная стратегия забора образцов для глубоко расположенной лимфомы остается предметом дискуссий.

Seminal works

• skoog-tani-2009

Frequently asked questions

Какой тип цитологического образца подходит для проточной цитометрии?

Подходят образцы, которые могут быть диспергированы в жизнеспособную одноклеточную суспензию, такие как аспираты тонкой иглой лимфатических узлов и выпоты; клетки должны оставаться жизнеспособными и нефиксированными для мечения антителами.

Почему проточная цитометрия особенно полезна при лимфоме?

Она быстро измеряет множество антигенов на большом количестве отдельных клеток, позволяя обнаруживать клональные или аберрантные лимфоидные популяции, например, посредством ограничения легких цепей, что поддерживает диагностику и субклассификацию лимфом.