Цитохимия и проточная цитометрия при лейкозе

Цитохимия и проточная цитометрия — это лабораторные методы, которые превращают диагноз лейкоза из морфологического впечатления в определённую линию дифференцировки и иммунофенотип. Цитохимические окрашивания выявляют ферментативные и метаболические свойства лейкозных клеток, в то время как многопараметрическая проточная цитометрия одновременно измеряет множество поверхностных и внутриклеточных маркеров, совместно определяя линию дифференцировки и выявляя измеряемую остаточную болезнь.

Definition

Цитохимия и проточная цитометрия — это лабораторные методы для характеристики лейкозных клеток: цитохимия использует окрашивания, выявляющие ферментативные или биохимические особенности (например, активность миелопероксидазы), а многопараметрическая проточная цитометрия измеряет множество поверхностных и внутриклеточных антигенов на клетку для определения линии дифференцировки, иммунофенотипа и количественной оценки остаточной болезни.

Scope

Эта тема охватывает методы, используемые для характеристики лейкозных клеток помимо морфологии: классические цитохимические окрашивания, такие как миелопероксидаза, и современное многопараметрическое проточно-цитометрическое иммунофенотипирование, включая стандартизированные панели антител и обнаружение измеряемой (минимальной) остаточной болезни. Это справочный материал по лабораторной методологии, а не клинический протокол.

Key concepts

• Миелопероксидаза и другие цитохимические окрашивания
• Определение линии дифференцировки по иммунофенотипу
• Многопараметрическая (многоцветная) проточная цитометрия
• Стандартизированные панели антител
• Аберрантная экспрессия антигенов
• Гейтирование и анализ популяций
• Обнаружение измеряемой (минимальной) остаточной болезни

Mechanisms

Цитохимические окрашивания используют клеточно-специфические ферменты и компоненты: активность миелопероксидазы, например, маркирует миелоидную линию и помогает отличить острый миелоидный лейкоз от острого лимфобластного лейкоза на окрашенном мазке. Проточная цитометрия суспендирует клетки в потоке, проходящем через лазеры, и регистрирует рассеяние света и флуоресценцию от антител-связанных маркеров, что позволяет измерять множество антигенов на каждой клетке; характерные и аберрантные комбинации антигенов определяют линию дифференцировки и идентифицируют лейкозную популяцию. Тот же подход, применяемый с высокой чувствительностью со стандартизированными панелями, обнаруживает небольшие остаточные лейкозные популяции после лечения как измеряемую остаточную болезнь (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018).

Clinical relevance

Эти методы лежат в основе определения линии дифференцировки и иммунофенотипирования, от которых зависит современная классификация лейкозов, а проточно-цитометрическая оценка измеряемой остаточной болезни стала важным маркером ответа в литературе. Эта статья описывает методы на справочном уровне и не является руководством по интерпретации результатов отдельного пациента.

Evidence & guidelines

Усилия по стандартизации, такие как панели антител EuroFlow, определяют воспроизводимое проточно-цитометрическое иммунофенотипирование, а Рабочая группа European LeukemiaNet MRD предоставляет консенсусные критерии для оценки измеряемой остаточной болезни при остром миелоидном лейкозе; критерии линии дифференцировки также включены в классификацию ВОЗ (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018; Arber et al., 2016).

History

Цитохимическое окрашивание было первоначальным средством уточнения морфологического диагноза острого лейкоза и определения линии дифференцировки. Проточно-цитометрическое иммунофенотипирование затем в значительной степени вытеснило цитохимию для определения линии дифференцировки путём измерения многих антигенов на клетку, а инициативы по стандартизации и консенсусные документы по измеряемой остаточной болезни позднее расширили его роль до воспроизводимой, высокочувствительной оценки (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018).

Seminal works

• van-dongen-2012
• schuurhuis-2018

Frequently asked questions

Почему окрашивание на миелопероксидазу полезно при остром лейкозе?

Миелопероксидаза является маркером миелоидной линии, поэтому её присутствие при цитохимическом окрашивании подтверждает диагноз острого миелоидного лейкоза и помогает отличить его от острого лимфобластного лейкоза.

Что такое обнаружение измеряемой остаточной болезни методом проточной цитометрии?

Это использование высокочувствительной многопараметрической проточной цитометрии для обнаружения небольших популяций лейкозных клеток, которые сохраняются после лечения, ниже уровня, видимого при рутинной морфологии, в качестве маркера ответа.