Méthodes de test de la sensibilité aux antimicrobiens

Le test de sensibilité aux antimicrobiens (TSA) est l'ensemble des méthodes de laboratoire standardisées utilisées pour déterminer si un micro-organisme est inhibé ou tué par un agent antimicrobien et à quelle concentration. Ses résultats, généralement une concentration minimale inhibitrice (CMI) ou un diamètre de zone d'inhibition, sont interprétés à l'aide de valeurs seuils (breakpoints) publiées pour classer l'organisme comme sensible, intermédiaire ou résistant.

Definition

Le test de sensibilité aux antimicrobiens est la mesure standardisée de la réponse in vitro d'un micro-organisme aux agents antimicrobiens, exprimée sous forme de CMI ou de diamètre de zone et interprétée à l'aide de valeurs seuils pour attribuer une catégorie sensible, intermédiaire ou résistante.

Scope

Cette entrée couvre les principales méthodes de TSA, les quantités qu'elles mesurent et la manière dont les résultats sont interprétés. Elle aborde les méthodes de dilution (microdilution en bouillon, dilution en gélose), les méthodes de diffusion (diffusion sur disque, bandelette à gradient) et les systèmes automatisés, ainsi que les systèmes de valeurs seuils du CLSI et de l'EUCAST. Elle est de nature méthodologique et ne fournit pas de recommandations de dosage ou de traitement.

Core questions

• Quelle concentration d'un antimicrobien inhibe la croissance de cet organisme ?
• En quoi les méthodes de dilution et de diffusion diffèrent-elles dans ce qu'elles mesurent et la manière dont elles sont lues ?
• Comment une CMI ou un diamètre de zone mesuré est-il traduit en catégorie clinique ?

Key concepts

• Concentration minimale inhibitrice (CMI)
• Microdilution en bouillon (méthode de référence)
• Dilution en gélose
• Diffusion sur disque (Kirby-Bauer)
• Diffusion en gradient (bandelette à gradient de CMI)
• Diamètre de la zone d'inhibition
• Valeurs seuils cliniques (CLSI, EUCAST)
• Catégories sensible-intermédiaire-résistant
• Souches de contrôle qualité et inoculum standardisé

Mechanisms

Les méthodes de TSA partagent une logique commune : un inoculum standardisé de l'organisme est exposé à des concentrations définies d'un antimicrobien dans des conditions contrôlées, et l'inhibition de la croissance est lue. Les méthodes de dilution (microdilution en bouillon, considérée comme une méthode de référence, et dilution en gélose) déterminent la concentration la plus faible qui inhibe la croissance visible, la CMI. Les méthodes de diffusion placent le médicament dans une gélose de manière à ce qu'il diffuse pour former un gradient de concentration : la diffusion sur disque lit le diamètre de la zone d'inhibition, tandis que les bandelettes à gradient lisent la CMI là où l'ellipse d'inhibition croise une échelle calibrée. Les systèmes commerciaux automatisés génèrent des CMI à partir de microdilutions en bouillon et de détection optique ou turbidimétrique de la croissance. Les résultats sont interprétés à l'aide des valeurs seuils du CLSI ou de l'EUCAST, et des règles d'experts vérifient la cohérence des résultats avec les phénotypes de résistance connus (jorgensen-2009; leclercq-2013; clsi-m100; eucast-breakpoints).

Clinical relevance

Les résultats de sensibilité éclairent la gestion des maladies infectieuses, la gestion des antimicrobiens et la surveillance, et ils alimentent les antibiogrammes cumulatifs rapportés par les laboratoires. Cette entrée explique comment ces résultats sont produits et interprétés en tant que matériel de référence ; elle n'est pas une source de décisions diagnostiques ou de prescription individuelles.

Epidemiology

Étant donné que le TSA est standardisé, les résultats sont comparables entre les laboratoires et au fil du temps, permettant leur agrégation dans des antibiogrammes locaux et dans la surveillance nationale et internationale de la résistance. Le choix de la méthode, la version des valeurs seuils et le contrôle qualité influencent tous la comparabilité de ces données (clsi-m100; eucast-breakpoints).

History

Les tests de sensibilité se sont développés dans les décennies suivant l'introduction des antibiotiques. La méthode de diffusion sur disque a été standardisée dans les années 1960 et est devenue largement utilisée pour sa simplicité, tandis que la dilution en bouillon et en gélose fournissait des CMI quantitatives. Au fil du temps, des organismes de normalisation, notamment le CLSI aux États-Unis et l'EUCAST en Europe, ont formalisé les méthodes, les valeurs seuils et le contrôle qualité, et les systèmes automatisés et les bandelettes à gradient ont élargi la pratique courante (jorgensen-2009).

Debates

Différences entre les valeurs seuils du CLSI et de l'EUCAST

Le CLSI et l'EUCAST établissent les valeurs seuils en utilisant des processus liés mais distincts, et leurs catégorisations ainsi que la définition de la catégorie intermédiaire peuvent différer ; l'harmonisation et l'interprétation des résultats discordants sont des questions méthodologiques continues.

Reproductibilité près des valeurs seuils

Les CMI mesurées présentent une variabilité inhérente, de sorte que les résultats proches d'une valeur seuil peuvent être catégorisés différemment selon les réplicats ou les méthodes, ce qui complique l'interprétation des organismes à la limite.

Seminal works

• jorgensen-2009
• leclercq-2013
• clsi-m100

Frequently asked questions

Qu'est-ce qu'une concentration minimale inhibitrice (CMI) ?

La CMI est la concentration la plus faible d'un antimicrobien qui empêche la croissance visible d'un organisme dans des conditions standardisées ; c'est le résultat quantitatif que les méthodes de dilution visent à déterminer.

Pourquoi existe-t-il différentes méthodes de TSA ?

Les méthodes de dilution donnent une CMI numérique, les méthodes de diffusion comme la diffusion sur disque sont simples et peu coûteuses, et les systèmes automatisés offrent rapidité et débit ; les laboratoires choisissent parmi elles en fonction de l'organisme, des médicaments testés et des ressources disponibles.

Que signifient sensible, intermédiaire et résistant ?

Ce sont des catégories interprétatives attribuées en comparant une CMI ou un diamètre de zone mesuré aux valeurs seuils établies par les organismes de normalisation ; elles résument la probabilité qu'un organisme réponde à un agent dans des conditions usuelles et sont définies de manière méthodologique plutôt que comme un conseil de traitement.