Hybridation in situ en fluorescence (FISH) en cytologie

L'hybridation in situ en fluorescence (FISH) utilise des sondes d'ADN marquées par fluorescence qui se lient à des séquences complémentaires dans les noyaux cellulaires, rendant visibles des régions chromosomiques ou des gènes spécifiques sous un microscope à fluorescence. Appliquée aux spécimens cytologiques, elle peut détecter l'aneuploïdie, les amplifications géniques, les délétions et les réarrangements directement dans les cellules intactes, ajoutant ainsi une dimension cytogénétique à l'évaluation morphologique.

Definition

La FISH est une technique cytogénétique auxiliaire dans laquelle des sondes d'acides nucléiques marquées par fluorescence s'hybrident à des cibles d'ADN spécifiques au sein des cellules sur une préparation cytologique, permettant la visualisation des changements du nombre de copies chromosomiques et des réarrangements structurels.

Scope

Cette entrée couvre le principe de l'hybridation des sondes sur les préparations cytologiques, les types d'anomalies génomiques que la FISH peut résoudre, et ses applications cytologiques établies telles que les tests multi-cibles dans les spécimens urinaires et bronchiques. Il s'agit d'une référence méthodologique et ne fournit pas de protocoles de test ou d'interprétation.

Core questions

• Quelles anomalies chromosomiques ou au niveau des gènes la FISH peut-elle résoudre dans un spécimen cytologique donné ?
• Comment la conception des sondes et les critères de dénombrement des signaux déterminent-ils un résultat positif ?
• Comment la FISH complète-t-elle la morphologie cytologique dans les échantillons équivoques ou atypiques ?

Key concepts

• Hybridation de sondes spécifiques à une séquence
• Sondes centromériques, spécifiques de locus et "break-apart"
• Détection de l'aneuploïdie et du nombre de copies
• Panels de sondes multi-cibles (par exemple, UroVysion)
• Dénombrement des signaux et seuils de score
• Application aux cellules intactes sur lames

Mechanisms

L'ADN de la sonde dénaturé, monocaténaire, porté par un fluorophore, s'apparie à sa séquence cible complémentaire au sein de l'ADN nucléaire dénaturé des cellules fixées sur une lame ; après élimination par lavage des sondes non liées, les signaux liés sont comptés sous microscope à fluorescence. Les sondes centromériques indiquent le nombre de copies chromosomiques, les sondes spécifiques de locus détectent l'amplification ou la délétion d'une région, et les sondes "break-apart" bicolores révèlent les réarrangements par la séparation des signaux appariés. Les panels multi-cibles combinent plusieurs sondes afin que les profils d'aneuploïdie caractéristiques de la malignité puissent être reconnus dans les cellules d'apparence morphologiquement ambiguë.

Clinical relevance

La FISH ajoute des informations cytogénétiques objectives à la cytologie, par exemple en aidant à évaluer les échantillons urothéliaux atypiques ou à évaluer la cytologie pulmonaire, et elle est utilisée comme un complément plutôt qu'un remplacement de l'examen morphologique. Cette entrée décrit comment la méthode génère des informations ; la sélection et l'interprétation spécifiques des tests sont des décisions de laboratoire et cliniques et ne constituent pas un avis individualisé.

Evidence & guidelines

Des études sur échantillons appariés du test multi-cible UroVysion dans l'urine émise ont comparé ses performances à celles de la cytologie conventionnelle pour la détection du carcinome urothélial, rapportant des forces et des limites complémentaires (Lavery et al., 2017; Dimashkieh et al., 2013). La FISH multi-cible a également été évaluée sur des spécimens de cytologie bronchique pour la détection du cancer du poumon (Zhai et al., 2015).

History

L'hybridation in situ a été développée pour la première fois pour les préparations tissulaires et chromosomiques ; la substitution des marqueurs fluorescents aux marqueurs radioactifs a rendu les tests multi-couleurs et multi-sondes pratiques et a permis d'appliquer la technique directement aux lames cytologiques. Les panels urinaires multi-cibles sont devenus l'une des applications cytologiques les plus étudiées.

Debates

Comment la FISH et la cytologie conventionnelle devraient-elles être combinées dans les échantillons urinaires atypiques ?

Des études montrent que la FISH et la cytologie ont une sensibilité et une spécificité complémentaires, ce qui soulève la question de savoir si la FISH est mieux utilisée comme test réflexe, comme complément à la morphologie, ou comme outil de triage, sans qu'une approche unique ne soit universellement adoptée.

Seminal works

• dimashkieh-2013
• lavery-2017

Frequently asked questions

Quels types d'anomalies la FISH peut-elle détecter dans les échantillons cytologiques ?

La FISH peut révéler l'aneuploïdie chromosomique, les amplifications et délétions géniques, et les réarrangements structurels en comptant les signaux de sondes fluorescentes dans les noyaux cellulaires individuels sur la lame.

La FISH remplace-t-elle la cytologie conventionnelle ?

Non ; elle est utilisée comme un complément. La FISH et la cytologie morphologique ont des forces complémentaires, et la FISH ajoute des informations cytogénétiques plutôt que de se substituer à l'évaluation visuelle des cellules.