Techniques Ancillaires et Méthodes Moléculaires en Cytopathologie

Les techniques ancillaires sont des méthodes de laboratoire appliquées au matériel cytologique après l'examen des frottis colorés selon les méthodes de Papanicolaou et de Romanowsky, dans le but d'affiner une impression morphologique, de classer une tumeur ou de détecter une altération cliniquement pertinente. Elles étendent la portée de la cytologie au-delà de la seule morphologie, permettant à de petits échantillons tels que les ponctions à l'aiguille fine, les épanchements et les préparations exfoliatives de fournir des informations immunophénotypiques, cytogénétiques et moléculaires.

Definition

Les techniques ancillaires en cytopathologie sont des études de laboratoire complémentaires réalisées sur des préparations cytologiques ou du matériel cellulaire résiduel pour compléter le diagnostic morphologique, comprenant des méthodes immunophénotypiques, cytogénétiques, moléculaires et computationnelles.

Scope

Ce domaine oriente le lecteur vers les principales méthodes complémentaires utilisées sur les spécimens cytologiques : l'immunocytochimie pour les marqueurs protéiques, l'hybridation in situ en fluorescence pour les altérations chromosomiques et au niveau des gènes, la cytométrie en flux pour l'immunophénotypage des suspensions cellulaires, les tests moléculaires et de détection du papillomavirus humain sur le matériel cytologique, et la pathologie numérique avec analyse automatisée d'images. Il s'agit d'une vue d'ensemble structurelle ; chaque technique est traitée en détail dans son propre nœud thématique.

Sub-topics

• Pathologie numérique et analyse d'images automatisée en cytologie
• Cytométrie en flux en cytopathologie
• Hybridation in situ en fluorescence (FISH) en cytologie
• Immunocytochimie et marqueurs cellulaires
• Tests moléculaires et détection du VPH sur des échantillons cytologiques

Core questions

• Quelle méthode ancillaire est appropriée pour un spécimen cytologique et une question diagnostique donnés ?
• Comment la préparation et la fixation des spécimens affectent-elles la validité des résultats immunocytochimiques, FISH et moléculaires ?
• Comment le matériel cytologique limité peut-il être trié afin de préserver à la fois les études morphologiques et ancillaires ?

Key concepts

• Adéquation et triage des spécimens
• Préparation des blocs cellulaires
• Immunophénotypage
• Validation et facteurs pré-analytiques
• Tests réflexes et complémentaires
• Protocoles économisant l'échantillon

Mechanisms

Les échantillons cytologiques peuvent être traités sous forme de frottis directs, de préparations en milieu liquide, de cytocentrifugations ou de blocs cellulaires ; la préparation choisie détermine les méthodes ancillaires réalisables. L'immunocytochimie localise les antigènes protéiques à l'aide d'anticorps marqués, l'hybridation in situ en fluorescence visualise des séquences d'ADN spécifiques avec des sondes fluorescentes, la cytométrie en flux mesure l'expression des antigènes sur les cellules en suspension, et les tests moléculaires extraient et interrogent les acides nucléiques. Étant donné que le matériel cytologique est souvent rare, un thème récurrent est le triage de l'échantillon afin que la morphologie et une ou plusieurs études complémentaires puissent être réalisées.

Clinical relevance

Les techniques ancillaires élargissent les informations qu'un échantillon cytologique peut fournir, soutenant la classification tumorale, l'attribution de lignée et la détection de biomarqueurs qui sont rapportés en complément de la morphologie. En tant que matériel de référence, ce domaine décrit comment ces informations sont générées ; la sélection et l'interprétation spécifiques des tests relèvent des décisions du laboratoire clinique et ne constituent pas ici un conseil individualisé.

Evidence & guidelines

Des organismes professionnels ont publié des cadres de validation et de rapport pertinents pour ces méthodes, y compris la directive du College of American Pathologists sur la validation de l'imagerie de lames entières pour un usage diagnostique (Pantanowitz et al., 2013). Les preuves spécifiques à chaque méthode, telles que le séquençage de nouvelle génération réalisé directement sur le matériel de ponction à l'aiguille fine (Qiu et al., 2015), sont résumées dans les nœuds thématiques correspondants.

History

La cytopathologie a débuté comme une discipline purement morphologique basée sur la coloration de Papanicolaou. Au cours des décennies suivantes, l'immunocytochimie, puis l'hybridation in situ et la cytométrie en flux, et plus récemment les tests moléculaires basés sur les acides nucléiques et l'analyse numérique d'images, ont été adaptés de l'histopathologie et de la médecine de laboratoire aux échantillons plus petits et préparés différemment rencontrés en cytologie.

Seminal works

• fetsch-abati-2001
• pantanowitz-2013

Frequently asked questions

Pourquoi les techniques ancillaires sont-elles particulièrement importantes en cytologie ?

Les échantillons cytologiques sont souvent petits et dépourvus d'architecture, de sorte que les méthodes complémentaires qui ajoutent des informations immunophénotypiques ou moléculaires permettent souvent une classification définitive que la morphologie seule ne peut pas fournir.

Qu'est-ce qu'un bloc cellulaire et pourquoi est-il important pour les tests ancillaires ?

Un bloc cellulaire est une préparation incluse en paraffine réalisée à partir de matériel cytologique résiduel ; il fournit des coupes adaptées à l'immunocytochimie, à l'hybridation in situ et à l'extraction moléculaire, ce qui en fait un élément clé pour la réalisation d'études ancillaires sur les spécimens cytologiques.