الاختبارات الجزيئية والكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري في العينات الخلوية

تطبق الاختبارات الجزيئية على العينات الخلوية فحوصات قائمة على الحمض النووي للخلايا التي يتم الحصول عليها عن طريق التقشير أو الشفط، للكشف عن أهداف الحمض النووي (DNA) أو الحمض النووي الريبوزي (RNA) التي تكشف عن العدوى أو الطفرات أو غيرها من التغيرات ذات الصلة سريريًا. يُعد الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري عالي الخطورة (HPV) في عينات عنق الرحم الخلوية المثال الأكثر انتشارًا، بينما يوسع تسلسل عينات الشفط بالإبرة الدقيقة التشخيص الجزيئي ليشمل الأورام الصلبة.

Definition

الاختبار الجزيئي على العينات الخلوية هو تطبيق فحوصات قائمة على الحمض النووي - بما في ذلك الكشف عن الحمض النووي الفيروسي وتحديد طفرات الأورام - على الخلايا التي يتم الحصول عليها عن طريق علم الخلايا التقشيري أو الشفطي أو على المواد السائلة المتبقية منها.

Scope

يغطي هذا المدخل استخدام المواد الخلوية والسائلة المتبقية كمصدر للأحماض النووية، والكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري في فحص عنق الرحم، والفحوصات الجزيئية الأوسع مثل تسلسل الجيل التالي على عينات الشفط. وهو نظرة عامة منهجية ومرجعية ولا يقدم بروتوكولات فحص أو إرشادات علاجية.

Core questions

• ما هي العوامل قبل التحليلية التي تحدد ما إذا كانت المادة الخلوية تنتج حمضًا نوويًا كافيًا للاختبار؟
• كيف يكمل الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري عالي الخطورة علم الخلايا المورفولوجي لعنق الرحم في الفحص؟
• ما هي الفحوصات الجزيئية التي يمكن إجراؤها على عينات الشفط بالإبرة الدقيقة والمواد الخلوية المتبقية؟

Key concepts

• استخلاص الحمض النووي من المواد الخلوية
• الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري عالي الخطورة
• علم الخلايا السائل كأساس جزيئي
• استراتيجيات الاختبار الانعكاسي والمشترك
• تسلسل الجيل التالي على عينات الشفط
• كفاية العينة للفحوصات الجزيئية

Mechanisms

تحتفظ العينات الخلوية، وخاصة المستحضرات السائلة، بالخلايا والسائل المتبقي الذي يمكن استخلاص الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA) منه؛ ثم يتم فحص هذه الأحماض النووية بواسطة فحوصات التضخيم أو التهجين أو التسلسل. في تطبيقات عنق الرحم، تكشف الفحوصات عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبوزي لأنواع فيروس الورم الحليمي البشري عالية الخطورة التي تكمن عدواها المستمرة وراء التسرطن العنقي، ويمكن دمج هذا الاختبار مع علم الخلايا المورفولوجي أو استبداله به. في علم خلايا الأورام الصلبة، يمكن لمادة الشفط بالإبرة الدقيقة أن توفر حمضًا نوويًا كافيًا للتسلسل المستهدف أو تسلسل الجيل التالي لتحديد التغيرات ذات الصلة بالتشخيص أو العلاج.

Clinical relevance

يحول الاختبار الجزيئي العينة الخلوية إلى مصدر للمعلومات الجينومية والفيروسية المستخدمة في التصنيف، وتحديد المخاطر، والإبلاغ عن المؤشرات الحيوية؛ وقد أعاد الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري على وجه الخصوص تشكيل نماذج فحص عنق الرحم. يصف هذا المدخل كيفية إجراء هذا الاختبار؛ أما خوارزميات الفحص المحددة والقرارات القائمة على المؤشرات الحيوية فهي مسائل سريرية وليست نصيحة فردية هنا.

Epidemiology

تُعد العدوى المستمرة بأنواع فيروس الورم الحليمي البشري عالية الخطورة السبب الضروري لجميع حالات سرطان عنق الرحم تقريبًا، مما يجعل الكشف عن الحمض النووي الفيروسي في عينات عنق الرحم الخلوية هدفًا للفحص له أساس بيولوجي (Schiffman et al., 2007).

Evidence & guidelines

قامت أدلة الفحص العشوائية، بما في ذلك نتائج نهاية الدراسة من دراسة ATHENA، بتقييم اختبار فيروس الورم الحليمي البشري الأولي كاستراتيجية فحص أولية لعنق الرحم مقارنة بالنهج القائمة على علم الخلايا (Wright et al., 2015). بالنسبة للأورام الصلبة، أظهرت الدراسات أنه يمكن إجراء تسلسل الجيل التالي على عينات علم الخلايا بالشفط بالإبرة الدقيقة للحصول على تشخيصات جزيئية (Qiu et al., 2015).

History

أدى اكتشاف أن فيروس الورم الحليمي البشري عالي الخطورة هو السبب الضروري لسرطان عنق الرحم إلى تحويل علم خلايا عنق الرحم من فحص مورفولوجي بحت إلى بيئة للاختبار الجزيئي المشترك، ولاحقًا، الفحص الأولي لفيروس الورم الحليمي البشري. بالتوازي، أدى نمو العلاج الموجه للسرطان إلى تكييف الفحوصات الجزيئية والتسلسلية مع العينات الصغيرة التي يتم الحصول عليها عن طريق الشفط بالإبرة الدقيقة.

Debates

هل يجب أن يحل اختبار فيروس الورم الحليمي البشري الأولي محل فحص عنق الرحم القائم على علم الخلايا؟

تدعم التجارب مثل ATHENA اختبار فيروس الورم الحليمي البشري الأولي كفحص أولي، لكن التوليفة المثلى لاختبار فيروس الورم الحليمي البشري، وعلم الخلايا، والفرز لا تزال محل نقاش وتختلف عبر برامج الفحص.

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

هل يمكن إجراء الاختبارات الجزيئية على نفس العينة المستخدمة في علم الخلايا؟

غالبًا نعم؛ تحتفظ مستحضرات علم الخلايا السائلة بالخلايا والسوائل المتبقية التي يمكن استخلاص الأحماض النووية منها، مما يسمح بالكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري أو غيرها من الفحوصات الجزيئية على نفس العينة.

لماذا يستخدم اختبار فيروس الورم الحليمي البشري في فحص سرطان عنق الرحم؟

تُعد العدوى المستمرة بأنواع فيروس الورم الحليمي البشري عالية الخطورة السبب الضروري لجميع حالات سرطان عنق الرحم تقريبًا، لذا فإن الكشف عن الحمض النووي الفيروسي يحدد السكان المعرضين للخطر ويكمل أو، في بعض البرامج، يسبق علم الخلايا المورفولوجي.