分枝杆菌鉴定与耐药性检测

分枝杆菌鉴定和耐药性检测是用于检测结核分枝杆菌和其他分枝杆菌、将其鉴定至种水平，并确定其对抗菌分枝杆菌药物敏感性的实验室方法。由于分枝杆菌生长缓慢，该领域将显微镜检查和培养与能够同时检测病原体和关键耐药标志物的快速分子检测方法相结合。

Definition

分枝杆菌鉴定是指从临床样本中对分枝杆菌进行实验室检测和种水平鉴定；耐药性检测是通过表型或分子方法，确定分枝杆菌分离株对抗菌分枝杆菌药物的敏感性。

Scope

本条目涵盖抗酸染色显微镜检查、分枝杆菌培养、菌种鉴定、表型和分子药物敏感性检测，以及快速分子检测耐药性，例如结核病中的利福平耐药性。它将这些视为实验室方法，不提供治疗方案或剂量。

Core questions

• 此样本中是否存在分枝杆菌，并且该病原体是结核分枝杆菌还是非结核分枝杆菌？
• 哪些方法——抗酸染色显微镜检查、培养、分子检测或蛋白质组学鉴定——可以检测和鉴定分枝杆菌？
• 该分离株是否对关键抗菌分枝杆菌药物耐药，以及如何通过表型或分子方法确定？
• 分枝杆菌的缓慢生长和分子检测的速度如何影响实验室工作流程？

Key concepts

• 抗酸染色（Ziehl-Neelsen, auramine）显微镜检查
• 分枝杆菌培养（固体和液体培养基）
• 结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌
• 表型药物敏感性检测
• 耐药性的分子检测（例如利福平耐药性）
• 用于直接检测的核酸扩增
• 线探针和盒式检测
• 生长缓慢和周转时间

Mechanisms

分枝杆菌的检测始于抗酸染色显微镜检查（对富含脂质的细胞壁进行染色），以及在固体或液体培养基上进行培养。由于分枝杆菌生长缓慢，培养可能需要数周时间。菌种鉴定使用分子探针、测序或蛋白质组学方法（如质谱法）区分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌（Clark et al., 2013）。药物敏感性检测通过在药物存在下生长进行表型检测，或越来越多地通过分子检测耐药相关突变进行。基于盒式试剂的自动化核酸扩增技术可以在数小时内直接从样本中检测出结核分枝杆菌和利福平耐药性，而培养检测则需要数周（Boehme et al., 2010），实时PCR更广泛地支持实验室中的直接分子检测（Espy et al., 2006）。综合性综述将这些实验室方法置于更广泛的结核病诊断和监测背景中（Pai et al., 2016）。

Clinical relevance

分枝杆菌鉴定和耐药性检测产生的信息对于结核病和非结核分枝杆菌病的临床推理以及公共卫生控制至关重要。本条目描述了这些实验室结果是如何产生的以及它们的局限性；它属于参考资料，不为个体开具抗菌分枝杆菌方案或剂量。

Epidemiology

分枝杆菌实验室检测是结核病控制不可或缺的一部分：快速分子检测病原体和耐药性缩短了识别耐药结核病的路径，并为监测提供了信息（Boehme et al., 2010）。结核病综述强调了诊断在全球结核病流行病学和管理中的作用（Pai et al., 2016）。

History

分枝杆菌诊断在一个多世纪以来一直依赖抗酸染色显微镜检查和缓慢培养，后来才增加了表型药物敏感性检测。核酸扩增技术，特别是能够直接从痰液中在数小时内报告结核分枝杆菌和利福平耐药性的自动化盒式检测方法的引入，标志着实验室实践的重大变革（Boehme et al., 2010），这与分子微生物学的更广泛发展相吻合（Espy et al., 2006）。

Seminal works

• boehme-2010
• pai-2016
• espy-2006

Frequently asked questions

为什么分枝杆菌检测同时依赖培养和分子方法？

分枝杆菌生长缓慢，因此基于培养的鉴定和敏感性检测可能需要数周。分子检测方法可以在数小时内直接从样本中检测出病原体和关键耐药标志物，例如利福平耐药性，从而补充培养检测（Boehme et al., 2010）。

实验室中如何区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌？

两者都是抗酸性的，因此仅凭显微镜检查无法区分它们；种水平鉴定使用分子探针、测序或蛋白质组学方法来区分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌（Clark et al., 2013）。