分子诊断技术

分子诊断技术通过核酸而非细菌生长来检测和鉴定细菌，采用聚合酶链反应和测序等方法。它们可以直接从样本中识别微生物，通常比培养更快，有时在培养失败时也能奏效，并且可以检测耐药决定簇。

Definition

分子诊断技术是检测、扩增或测序微生物核酸以识别微生物或耐药决定簇的实验室方法，通常不需要培养微生物。

Scope

本主题涵盖核酸扩增检测、实时和多重聚合酶链反应、基于测序的鉴定以及综合征分子诊断板，以及它们的优势和解释注意事项。它被视为一种方法学主题，不提供针对个体患者的检测或治疗说明。

Core questions

• 核酸扩增检测如何检测细菌？
• 分子方法何时能在培养失败时成功，它们的局限性是什么？
• 分子诊断和基于培养的诊断如何相互补充？

Key concepts

• 核酸扩增检测
• 实时（定量）PCR
• 多重和综合征诊断板
• 16S rRNA基因测序
• 耐药基因检测
• 非活微生物检测
• 分析灵敏度和特异性

Mechanisms

分子方法针对特定的核酸序列并对其进行扩增，以便即使少量微生物也能被检测到；实时格式可量化目标并缩短周转时间，而多重诊断板可同时检测多种病原体（Espy 2006）。对16S rRNA等保守基因进行测序可以识别难以培养或表型鉴定的微生物。由于这些方法检测的是核酸而非生长，因此即使培养结果为阴性（包括抗生素暴露后），它们也能得出结果，但它们也可能检测到非活微生物或定植菌，因此结果需要结合具体情况进行解释。评论指出，分子诊断技术提高了速度和灵敏度，同时也带来了新的解释问题（Espy 2006；Caliendo 2013）。

Clinical relevance

分子诊断技术影响感染归因于微生物的速度和可靠性以及耐药性的检测，但其解释与培养不同，因为检测到基因与获得可存活、可进行药敏试验的微生物不同。本主题描述了实验室证据是如何产生的，并非个体诊断或治疗决策的基础。

Evidence & guidelines

综合性评论描述了实时PCR和其他分子方法在常规临床微生物学中的应用和性能（Espy 2006），以及向改进传染病诊断的更广泛转变（Caliendo 2013）；标准教科书详细介绍了分子方法及其在培养中的地位（Jorgensen 2015）。

History

20世纪80年代引入的聚合酶链反应使靶向核酸检测变得实用，随后实时和多重格式进入常规临床实验室，拓宽了分子诊断和基于序列的鉴定（Espy 2006；Caliendo 2013）。

Seminal works

• espy-2006
• caliendo-2013

Frequently asked questions

分子检测能否取代培养？

不能完全取代；它们通常能更快地检测到微生物，有时在培养失败时也能奏效，但培养仍能提供可存活的分离株用于进一步鉴定，并且检测核酸的分子结果需要仔细解释。

为什么分子检测结果可能为阳性而培养结果为阴性？

分子方法检测的是核酸而非生长，因此即使微生物非活或数量很少，包括在抗生素暴露后导致培养无法恢复的情况下，它们仍可能保持阳性。