Xét nghiệm phân tử và phát hiện HPV trên mẫu tế bào học

Xét nghiệm phân tử trên mẫu tế bào học áp dụng các xét nghiệm dựa trên axit nucleic cho các tế bào thu được bằng cách bong tróc hoặc hút, phát hiện DNA hoặc RNA đích cho thấy nhiễm trùng, đột biến hoặc các thay đổi liên quan đến lâm sàng khác. Việc phát hiện vi rút u nhú ở người (HPV) có nguy cơ cao trên các mẫu tế bào học cổ tử cung là ví dụ phổ biến nhất, trong khi việc giải trình tự các mẫu chọc hút bằng kim nhỏ mở rộng chẩn đoán phân tử sang các khối u rắn.

Definition

Xét nghiệm phân tử trên mẫu tế bào học là việc áp dụng các xét nghiệm dựa trên axit nucleic - bao gồm phát hiện axit nucleic của virus và lập hồ sơ đột biến khối u - cho các tế bào thu được bằng tế bào học bong tróc hoặc chọc hút hoặc cho vật liệu lỏng còn lại của chúng.

Scope

Mục này bao gồm việc sử dụng vật liệu tế bào học và vật liệu còn lại dựa trên chất lỏng làm nguồn axit nucleic, phát hiện HPV trong sàng lọc cổ tử cung và các xét nghiệm phân tử rộng hơn như giải trình tự thế hệ tiếp theo trên các mẫu chọc hút. Đây là một tổng quan về phương pháp luận và tài liệu tham khảo và không cung cấp các giao thức sàng lọc hoặc hướng dẫn điều trị.

Core questions

• Những yếu tố tiền phân tích nào xác định liệu vật liệu tế bào học có cung cấp đủ axit nucleic để xét nghiệm không?
• Việc phát hiện HPV có nguy cơ cao bổ sung cho tế bào học cổ tử cung hình thái trong sàng lọc như thế nào?
• Những xét nghiệm phân tử nào có thể được thực hiện trên mẫu chọc hút bằng kim nhỏ và vật liệu tế bào học còn lại?

Key concepts

• Chiết xuất axit nucleic từ vật liệu tế bào học
• Phát hiện HPV có nguy cơ cao
• Tế bào học dựa trên chất lỏng làm chất nền phân tử
• Chiến lược phản xạ và đồng xét nghiệm
• Giải trình tự thế hệ tiếp theo trên mẫu chọc hút
• Độ đầy đủ của mẫu cho các xét nghiệm phân tử

Mechanisms

Các mẫu tế bào học, đặc biệt là các chế phẩm dựa trên chất lỏng, giữ lại các tế bào và dịch còn lại từ đó có thể chiết xuất DNA và RNA; các axit nucleic này sau đó được phân tích bằng các xét nghiệm khuếch đại, lai ghép hoặc giải trình tự. Trong các ứng dụng cổ tử cung, các xét nghiệm phát hiện DNA hoặc RNA của các loại HPV có nguy cơ cao mà nhiễm trùng dai dẳng là nguyên nhân gây ung thư cổ tử cung, và xét nghiệm như vậy có thể được kết hợp hoặc thay thế cho tế bào học hình thái. Trong tế bào học khối u rắn, vật liệu chọc hút bằng kim nhỏ có thể cung cấp đủ axit nucleic để giải trình tự đích hoặc giải trình tự thế hệ tiếp theo nhằm xác định các thay đổi liên quan đến chẩn đoán hoặc điều trị.

Clinical relevance

Xét nghiệm phân tử biến một mẫu tế bào học thành nguồn thông tin bộ gen và virus được sử dụng trong phân loại, phân tầng nguy cơ và báo cáo dấu ấn sinh học; đặc biệt, việc phát hiện HPV đã định hình lại các mô hình sàng lọc cổ tử cung. Mục này mô tả cách thực hiện xét nghiệm như vậy; các thuật toán sàng lọc cụ thể và các quyết định dựa trên dấu ấn sinh học là các vấn đề lâm sàng và không phải là lời khuyên cá nhân hóa ở đây.

Epidemiology

Nhiễm trùng dai dẳng với các loại HPV có nguy cơ cao là nguyên nhân cần thiết của gần như tất cả các bệnh ung thư cổ tử cung, điều này làm cho việc phát hiện axit nucleic của virus trên các mẫu tế bào học cổ tử cung trở thành một mục tiêu sàng lọc có cơ sở sinh học (Schiffman et al., 2007).

Evidence & guidelines

Bằng chứng sàng lọc ngẫu nhiên, bao gồm kết quả cuối cùng của nghiên cứu ATHENA, đã đánh giá xét nghiệm HPV ban đầu như một chiến lược sàng lọc cổ tử cung hàng đầu so với các phương pháp dựa trên tế bào học (Wright et al., 2015). Đối với các khối u rắn, các nghiên cứu đã chỉ ra rằng giải trình tự thế hệ tiếp theo có thể được thực hiện trên các mẫu tế bào học chọc hút bằng kim nhỏ để có được chẩn đoán phân tử (Qiu et al., 2015).

History

Việc phát hiện ra rằng HPV có nguy cơ cao là nguyên nhân cần thiết của ung thư cổ tử cung đã biến tế bào học cổ tử cung từ một sàng lọc hình thái thuần túy thành một môi trường để đồng xét nghiệm phân tử và sau đó là sàng lọc HPV ban đầu. Song song đó, sự phát triển của liệu pháp ung thư đích đã thúc đẩy việc điều chỉnh các xét nghiệm phân tử và giải trình tự cho các mẫu nhỏ được tạo ra bằng cách chọc hút bằng kim nhỏ.

Debates

Xét nghiệm HPV ban đầu có nên thay thế sàng lọc cổ tử cung dựa trên tế bào học không?

Các thử nghiệm như ATHENA ủng hộ xét nghiệm HPV ban đầu như một sàng lọc hàng đầu, nhưng sự kết hợp tối ưu giữa xét nghiệm HPV, tế bào học và phân loại tiếp tục được tranh luận và thay đổi tùy theo các chương trình sàng lọc.

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

Các xét nghiệm phân tử có thể được thực hiện trên cùng một mẫu được sử dụng cho tế bào học không?

Thông thường là có; các chế phẩm tế bào học dựa trên chất lỏng giữ lại các tế bào và dịch còn lại từ đó có thể chiết xuất axit nucleic, cho phép phát hiện HPV hoặc các xét nghiệm phân tử khác trên cùng một mẫu.

Tại sao xét nghiệm HPV được sử dụng trong sàng lọc ung thư cổ tử cung?

Nhiễm trùng dai dẳng với các loại HPV có nguy cơ cao là nguyên nhân cần thiết của gần như tất cả các bệnh ung thư cổ tử cung, vì vậy việc phát hiện axit nucleic của virus xác định quần thể có nguy cơ và bổ sung hoặc, trong một số chương trình, đi trước tế bào học hình thái.