Các Kỹ thuật Hỗ trợ và Phương pháp Phân tử trong Tế bào học Bệnh lý
Các kỹ thuật hỗ trợ là các phương pháp xét nghiệm được áp dụng cho vật liệu tế bào học sau khi đã kiểm tra các tiêu bản nhuộm Papanicolaou và Romanowsky thông thường, nhằm tinh chỉnh ấn tượng hình thái, phân loại khối u hoặc phát hiện một thay đổi có thể can thiệp lâm sàng. Chúng mở rộng phạm vi của tế bào học vượt ra ngoài hình thái học đơn thuần, cho phép các mẫu nhỏ như chọc hút kim nhỏ, dịch tiết và các chế phẩm bong tróc cung cấp thông tin kiểu hình miễn dịch, di truyền tế bào và phân tử.
Definition
Các kỹ thuật hỗ trợ trong tế bào học bệnh lý là các nghiên cứu xét nghiệm bổ trợ được thực hiện trên các chế phẩm tế bào học hoặc vật liệu tế bào còn lại để bổ sung chẩn đoán hình thái, bao gồm các phương pháp kiểu hình miễn dịch, di truyền tế bào, phân tử và tính toán.
Scope
Lĩnh vực này định hướng cho người đọc về các phương pháp bổ trợ chính được sử dụng trên các mẫu tế bào học: hóa mô miễn dịch cho các dấu ấn protein, lai huỳnh quang tại chỗ (FISH) cho các thay đổi cấp độ nhiễm sắc thể và gen, đo tế bào dòng chảy (flow cytometry) để định kiểu hình miễn dịch các huyền phù tế bào, xét nghiệm phân tử và virus papilloma ở người (HPV) trên vật liệu tế bào học, và bệnh học kỹ thuật số với phân tích hình ảnh tự động. Đây là một tổng quan cấu trúc; mỗi kỹ thuật được trình bày chi tiết trong mục chủ đề riêng của nó.
Sub-topics
Core questions
- Phương pháp hỗ trợ nào phù hợp cho một mẫu tế bào học và câu hỏi chẩn đoán cụ thể?
- Việc chuẩn bị và cố định mẫu ảnh hưởng như thế nào đến tính hợp lệ của kết quả hóa mô miễn dịch, FISH và phân tử?
- Làm thế nào để phân loại vật liệu tế bào học hạn chế để cả nghiên cứu hình thái và hỗ trợ đều được bảo toàn?
Key concepts
- Tính đầy đủ và phân loại mẫu
- Chuẩn bị khối tế bào
- Định kiểu hình miễn dịch
- Xác nhận và các yếu tố tiền phân tích
- Xét nghiệm phản xạ và bổ trợ
- Quy trình làm việc tiết kiệm mẫu
Mechanisms
Các mẫu tế bào học có thể được xử lý dưới dạng phết trực tiếp, chế phẩm dựa trên chất lỏng, ly tâm tế bào (cytospins) hoặc khối tế bào (cell blocks); chế phẩm được chọn sẽ xác định các phương pháp hỗ trợ nào khả thi. Hóa mô miễn dịch định vị các kháng nguyên protein bằng kháng thể được đánh dấu, lai huỳnh quang tại chỗ hình dung các trình tự DNA cụ thể bằng các đầu dò huỳnh quang, đo tế bào dòng chảy đo biểu hiện kháng nguyên trên các tế bào trong huyền phù, và các xét nghiệm phân tử chiết xuất và thẩm vấn axit nucleic. Vì vật liệu tế bào học thường khan hiếm, một chủ đề lặp lại là phân loại mẫu để có thể thực hiện cả hình thái học và một hoặc nhiều nghiên cứu bổ trợ.
Clinical relevance
Các kỹ thuật hỗ trợ mở rộng những gì một mẫu tế bào học có thể trả lời, hỗ trợ phân loại khối u, xác định dòng tế bào và phát hiện các dấu ấn sinh học được báo cáo cùng với hình thái học. Là tài liệu tham khảo, lĩnh vực này mô tả cách thông tin đó được tạo ra; việc lựa chọn và diễn giải xét nghiệm cụ thể là các quyết định của phòng thí nghiệm lâm sàng và không phải là lời khuyên cá nhân hóa ở đây.
Evidence & guidelines
Các tổ chức chuyên môn đã ban hành các khuôn khổ xác nhận và báo cáo liên quan đến các phương pháp này, bao gồm hướng dẫn của College of American Pathologists về việc xác nhận hình ảnh toàn bộ tiêu bản để sử dụng chẩn đoán (Pantanowitz et al., 2013). Bằng chứng cụ thể theo phương pháp, chẳng hạn như giải trình tự thế hệ tiếp theo được thực hiện trực tiếp trên vật liệu chọc hút kim nhỏ (Qiu et al., 2015), được tóm tắt trong các mục chủ đề tương ứng.
History
Tế bào học bệnh lý bắt đầu như một ngành thuần túy hình thái học được xây dựng trên phương pháp nhuộm Papanicolaou. Trong những thập kỷ tiếp theo, hóa mô miễn dịch, sau đó là lai tại chỗ và đo tế bào dòng chảy, và gần đây nhất là xét nghiệm phân tử dựa trên axit nucleic và phân tích hình ảnh kỹ thuật số đã được điều chỉnh từ mô bệnh học và y học xét nghiệm sang các mẫu nhỏ hơn, được chuẩn bị khác nhau gặp phải trong tế bào học.
Related topics
Seminal works
- fetsch-abati-2001
- pantanowitz-2013
Frequently asked questions
- Tại sao các kỹ thuật hỗ trợ đặc biệt quan trọng trong tế bào học?
- Các mẫu tế bào học thường nhỏ và thiếu cấu trúc, vì vậy các phương pháp bổ trợ bổ sung thông tin kiểu hình miễn dịch hoặc phân tử thường cho phép phân loại dứt khoát mà hình thái học đơn thuần không thể cung cấp.
- Khối tế bào là gì và tại sao nó quan trọng đối với xét nghiệm hỗ trợ?
- Khối tế bào là một chế phẩm được nhúng paraffin làm từ vật liệu tế bào học còn lại; nó cung cấp các lát cắt phù hợp cho hóa mô miễn dịch, lai tại chỗ và chiết xuất phân tử, làm cho nó trở thành một yếu tố hỗ trợ chính cho các nghiên cứu bổ trợ trên các mẫu tế bào học.