การย้อมสีแพปานิโคลาว

การย้อมสีแพปานิโคลาว (Papanicolaou stain) เป็นการย้อมสีโพลีโครมาติกมาตรฐานทางเซลล์พยาธิวิทยา พัฒนาโดย George Papanicolaou สำหรับการตรวจเซลล์ที่เตรียมแบบเปียก (wet-fixed cellular smears) โดยเป็นการรวมกันของสีย้อมนิวเคลียสกับสีคอนทราสต์สำหรับไซโทพลาสซึมหลายชนิด เพื่อสร้างเซลล์โปร่งใสหลายสี ซึ่งสามารถมองเห็นโครมาตินในนิวเคลียสและการเจริญของไซโทพลาสซึมได้อย่างชัดเจน ความชัดเจนของรายละเอียดนิวเคลียสทำให้เป็นรากฐานของการตรวจคัดกรองมะเร็งปากมดลูกและการตรวจเซลล์วิทยาจากการหลุดลอกโดยทั่วไป

Definition

การย้อมสีแพปานิโคลาวเป็นการย้อมสีทางเซลล์วิทยาแบบหลายสีที่ใช้กับตัวอย่างที่ตรึงด้วยแอลกอฮอล์ (ตรึงแบบเปียก) โดยใช้สีย้อมนิวเคลียสฮีมาทอกซิลินร่วมกับสีคอนทราสต์ไซโทพลาสซึมสีส้มและโพลีโครม เพื่อให้ได้เซลล์ที่โปร่งใสพร้อมรายละเอียดโครมาตินในนิวเคลียสที่ชัดเจน

Scope

บทความนี้ครอบคลุมองค์ประกอบและเหตุผลของการย้อมสีแพปานิโคลาว การตรึงสภาพแบบเปียกที่จำเป็น คุณสมบัติของเซลล์ที่แสดงให้เห็น และตำแหน่งในการรายงานทางเซลล์วิทยา เป็นข้อมูลอ้างอิงวิธีการและไม่ได้ให้คำแนะนำในการวินิจฉัยหรือการรักษา

Key concepts

• ข้อกำหนดสำหรับการตรึงสภาพแบบเปียก (แอลกอฮอล์)
• การย้อมสีนิวเคลียสด้วยฮีมาทอกซิลิน
• สีคอนทราสต์ไซโทพลาสซึม OG-6 และ EA
• ความโปร่งใสของไซโทพลาสซึมและการอ่านเซลล์ที่ทับซ้อนกัน
• การแสดงการเจริญของเซลล์สความัส
• รายละเอียดโครมาตินในนิวเคลียสสำหรับการประเมินความผิดปกติ

Mechanisms

การย้อมสีนี้ใช้กับสเมียร์ที่ถูกตรึงสภาพในขณะที่ยังชื้น ซึ่งช่วยรักษาสภาพของโครมาติน ฮีมาทอกซิลิน ซึ่งเป็นสีย้อมนิวเคลียสพื้นฐาน จะจับกับโครมาตินที่เป็นกรด ทำให้นิวเคลียสมีสีน้ำเงิน-ม่วง พร้อมรายละเอียดภายในที่ละเอียด จากนั้นไซโทพลาสซึมจะถูกย้อมสีคอนทราสต์ในสองขั้นตอน: สีย้อมสีส้ม (orange G) จะทำเครื่องหมายไซโทพลาสซึมของเซลล์สความัสที่มีเคราติน และส่วนผสมของอีโอซิน-เอเซอร์แบบโพลีโครมจะย้อมไซโทพลาสซึมอื่นๆ ในเฉดสีเขียว น้ำเงิน และชมพูที่ไล่ระดับกัน เนื่องจากสีย้อมถูกใช้ในความเข้มข้นที่ทำให้ไซโทพลาสซึมกึ่งโปร่งใส เซลล์ที่ทับซ้อนกันและกลุ่มเซลล์ยังคงสามารถอ่านได้ ซึ่งเป็นคุณสมบัติที่จำเป็นสำหรับสเมียร์ที่หนา การไล่ระดับสีนี้ยังแสดงการเจริญของเซลล์สความัส ช่วยแยกเซลล์ชั้นผิว (superficial) ออกจากเซลล์ชั้นกลาง (intermediate) และเซลล์พาราบาซัล (parabasal) (Papanicolaou 1942; Koss & Melamed 2006)

Clinical relevance

การย้อมสีแพปานิโคลาวเป็นวิธีการย้อมสีที่เป็นรากฐานของการตรวจคัดกรองมะเร็งปากมดลูกและเซลล์วิทยาเพื่อการวินิจฉัยส่วนใหญ่ และคุณสมบัติที่แสดงให้เห็นเป็นพื้นฐานของหมวดหมู่การรายงานที่เป็นมาตรฐาน บทความนี้อธิบายถึงการย้อมสีและสิ่งที่แสดงให้เห็นเพื่อเป็นพื้นฐานในการทำความเข้าใจเซลล์วิทยา ไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการตัดสินใจทางคลินิกส่วนบุคคล

Evidence & guidelines

กรอบการรายงานทางเซลล์วิทยาที่เป็นมาตรฐานสร้างขึ้นจากคุณสมบัติของเซลล์และนิวเคลียสที่การย้อมสีแพปานิโคลาวทำให้มองเห็นได้ ตัวอย่างเช่น ระบบ Bethesda สำหรับเซลล์วิทยาปากมดลูก กำหนดหมวดหมู่การตีความและเกณฑ์ความเพียงพอของตัวอย่างจากวัสดุที่ย้อมสีแพปานิโคลาว (Solomon 2002) ตำราอ้างอิงถือว่าการย้อมสีนี้เป็นวิธีการอ้างอิงสำหรับเซลล์วิทยาที่เน้นรายละเอียดนิวเคลียส ซึ่งเสริมกับการย้อมสี Romanowsky ที่แห้งในอากาศ (Bibbo & Wilbur 2014)

History

George Papanicolaou ได้อธิบายขั้นตอนการย้อมสีของเขาสำหรับสเมียร์ช่องคลอดในปี 1942 โดยต่อยอดจากการย้อมสีทางเนื้อเยื่อวิทยาในยุคก่อนหน้า แต่ปรับสมดุลสีและความโปร่งใสให้เหมาะสมสำหรับเซลล์ที่หลุดลอก การย้อมสีนี้เป็นรากฐานของการตรวจคัดกรองมะเร็งปากมดลูกที่ใช้ชื่อของเขา และต่อมาได้ถูกปรับใช้กับเซลล์วิทยาของอวัยวะเกือบทุกส่วน โดยมีการปรับเปลี่ยนสูตร (Papanicolaou 1942; Koss & Melamed 2006)

Key figures

• George Papanicolaou

Seminal works

• papanicolaou-1942
• solomon-2002

Frequently asked questions

เหตุใดการย้อมสีแพปานิโคลาวจึงต้องใช้สเมียร์ที่ตรึงแบบเปียก?

การตรึงสภาพแบบเปียก (แอลกอฮอล์) ช่วยรักษาสภาพของโครมาตินในนิวเคลียสที่ละเอียด ซึ่งเป็นสิ่งที่ส่วนประกอบของฮีมาทอกซิลินถูกออกแบบมาเพื่อแสดงให้เห็น สเมียร์ที่แห้งในอากาศจะสูญเสียรายละเอียดนี้ไป ดังนั้นการย้อมสีแพปานิโคลาวจึงสงวนไว้สำหรับตัวอย่างที่ถูกตรึงแบบเปียกอย่างรวดเร็ว

อะไรที่ทำให้การย้อมสีแพปานิโคลาวมีประโยชน์สำหรับการตรวจเซลล์วิทยาโดยเฉพาะ?

สีคอนทราสต์หลายชนิดช่วยให้ไซโทพลาสซึมโปร่งใส ทำให้เซลล์ที่ทับซ้อนกันในสเมียร์ยังคงสามารถอ่านได้ และยังแสดงทั้งรายละเอียดโครมาตินในนิวเคลียสและการเจริญของเซลล์สความัส ซึ่งเป็นคุณสมบัติสำคัญในการตีความทางเซลล์วิทยา