การตรึงและการย้อมชิ้นเนื้อตัวอย่าง
การตรึงและการย้อมเป็นสองขั้นตอนทางเคมีที่เปลี่ยนตัวอย่างเซลล์วิทยาที่ถูกนำมาวางให้เป็นสไลด์ที่สามารถตีความได้ การตรึงจะทำให้เซลล์คงที่และรักษาสภาพโครงสร้างภายในของเซลล์ไว้ จากนั้นการย้อมจะให้สีและความคมชัดที่ช่วยให้พยาธิแพทย์ทางเซลล์วิทยาสามารถแยกแยะนิวเคลียสออกจากไซโตพลาสซึมและอ่านรายละเอียดของโครมาตินได้ การจับคู่ระหว่างวิธีการตรึงกับสีย้อมเป็นการเลือกที่ตั้งใจซึ่งจะกำหนดว่าลักษณะของเซลล์ใดจะถูกเน้นเป็นพิเศษ
Definition
การตรึงและการย้อมชิ้นเนื้อตัวอย่างเป็นขั้นตอนเตรียมการที่รักษาสัณฐานวิทยาของเซลล์ (การตรึง) และให้สีเฉพาะแก่ส่วนประกอบของเซลล์ (การย้อม) เพื่อให้สามารถอ่านสไลด์เซลล์วิทยาภายใต้กล้องจุลทรรศน์ได้
Scope
บทความนี้อธิบายว่าทำไมและอย่างไรจึงมีการตรึงชิ้นเนื้อตัวอย่างทางเซลล์วิทยา (การตรึงแบบเปียกเทียบกับการปล่อยให้แห้งในอากาศโดยเจตนา) หลักการของสีย้อมทางเซลล์วิทยาหลักๆ และวิธีการจับคู่การตรึง-การย้อมเข้ากับคำถามในการวินิจฉัย เป็นข้อมูลอ้างอิงระดับวิธีการและไม่มีคำแนะนำเฉพาะสำหรับผู้ป่วย
Key concepts
- การตรึงด้วยแอลกอฮอล์แบบจับตัวเป็นก้อนและการตรึงแบบเปียก
- การปล่อยให้แห้งในอากาศโดยเจตนาเป็นสภาวะเตรียมการ
- การย้อมนิวเคลียสเทียบกับไซโตพลาสซึม
- สีย้อม Papanicolaou (โปร่งใส, มีหลายสี)
- สีย้อม Romanowsky สำหรับสเมียร์ที่แห้งในอากาศ
- สิ่งแปลกปลอมจากการแห้งและผลกระทบต่อรายละเอียดของนิวเคลียส
- การปิดสไลด์ด้วยกระจกปิด, การทำให้ใส, และความคงทนของสไลด์
Mechanisms
การตรึงจะหยุดการสลายตัวเอง (autolysis) และยึดโปรตีนและกรดนิวคลีอิกของเซลล์ให้อยู่กับที่ ในทางเซลล์วิทยา สารตรึงหลักคือเอทานอลหรือสเปรย์ที่มีแอลกอฮอล์ซึ่งใช้ในขณะที่สเมียร์ยังเปียกอยู่ (การตรึงแบบเปียก) ซึ่งจะรักษารายละเอียดโครมาตินของนิวเคลียสที่ละเอียดอ่อนซึ่งจำเป็นสำหรับการย้อม Papanicolaou อีกทางเลือกหนึ่งคือการปล่อยให้สเมียร์แห้งในอากาศ ซึ่งเป็นสภาวะที่ทำให้เซลล์แบนและขยายใหญ่ขึ้น และเป็นการเตรียมที่จำเป็นสำหรับการย้อม Romanowsky จากนั้นการย้อมจะใช้ประโยชน์จากความสัมพันธ์ของสีย้อมที่มีประจุกับส่วนประกอบของเซลล์: สีย้อมพื้นฐาน (ประจุบวก) จะจับกับโครมาตินของนิวเคลียสที่เป็นกรด ในขณะที่สีย้อมที่เป็นกรด (ประจุลบ) จะให้สีโปรตีนในไซโตพลาสซึม การย้อม Papanicolaou รวมฮีมาทอกซิลินสำหรับนิวเคลียสเข้ากับสีย้อมเสริมหลายชนิดเพื่อให้ได้เซลล์ที่โปร่งใสและมีหลายสี; การย้อม Romanowsky รวมสีย้อมอะซูร์และอีโอซินซึ่งการทำงานร่วมกันจะสร้างโครมาตินสีม่วงและสีเมทาโครมาติกที่เป็นลักษณะเฉพาะ (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006)
Clinical relevance
เนื่องจากการตรึงและการย้อมเป็นตัวกำหนดการมองเห็นของลักษณะเฉพาะที่ใช้ในการจำแนกเซลล์ จึงไม่สามารถแยกออกจากการวินิจฉัยและการรายงานทางเซลล์วิทยาได้ บทความนี้อธิบายวิธีการและเหตุผลเบื้องหลังเพื่อเป็นพื้นฐานในการทำความเข้าใจการปฏิบัติงานในห้องปฏิบัติการ ไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการตัดสินใจทางคลินิกส่วนบุคคล
Evidence & guidelines
วรรณกรรมทางระเบียบวิธีวิจัยได้กำหนดบทบาทเสริมของสีย้อมสองตระกูลหลัก ได้แก่ สีย้อม Papanicolaou ที่ตรึงด้วยแอลกอฮอล์สำหรับรายละเอียดของนิวเคลียสและโครมาติน และสีย้อม Romanowsky ที่แห้งในอากาศสำหรับลักษณะของไซโตพลาสซึมและพื้นหลัง และงานมาตรฐานของ Wittekind ได้กำหนดการรวมกันของอะซูร์ B-อีโอซิน Y เป็นสีย้อม Romanowsky-Giemsa อ้างอิง (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014) ตำราอ้างอิงเน้นย้ำว่าเวลาและคุณภาพของการตรึงเป็นปัจจัยหลักที่ควบคุมได้ซึ่งกำหนดผลลัพธ์ของการย้อมและสิ่งแปลกปลอม เช่น การบิดเบี้ยวของนิวเคลียสที่เกิดจากการแห้ง (Koss & Melamed 2006)
History
การย้อมทางเซลล์วิทยาพัฒนามาจากการศึกษาทางเคมีของเนื้อเยื่อในศตวรรษที่สิบเก้าและการย้อมทางโลหิตวิทยาของ Romanowsky และ Giemsa จากนั้นได้ถูกปรับเปลี่ยนสำหรับการตรวจเซลล์วิทยาจากการหลุดลอกโดยสีย้อม Papanicolaou ที่มีหลายสีและโปร่งใสสำหรับการสเมียร์ที่ตรึงแบบเปียกในช่วงทศวรรษ 1940 งานในปลายศตวรรษที่ยี่สิบ รวมถึงการศึกษาการกำหนดมาตรฐานสีย้อมของ Wittekind พยายามทำให้การย้อม Romanowsky สามารถทำซ้ำได้ในห้องปฏิบัติการต่างๆ (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982)
Key figures
- George Papanicolaou
- Dietrich Wittekind
Related topics
Seminal works
- papanicolaou-1942
- wittekind-1982
- koss-melamed-2006
Frequently asked questions
- ทำไมสเมียร์เซลล์วิทยาบางชนิดต้องถูกตรึงในขณะที่ยังเปียกอยู่?
- การตรึงแบบเปียก (ด้วยแอลกอฮอล์) จะรักษารายละเอียดโครมาตินของนิวเคลียสที่ละเอียดอ่อนซึ่งสีย้อม Papanicolaou ต้องการ หากสเมียร์ดังกล่าวแห้งก่อนการตรึง สิ่งแปลกปลอมจากการแห้งจะทำให้เกิดการบิดเบี้ยวของนิวเคลียสและทำให้การตีความด้อยลง
- อะไรเป็นตัวกำหนดว่าชิ้นเนื้อตัวอย่างทางเซลล์วิทยาจะได้รับการย้อมด้วยสีย้อมชนิดใด?
- ถูกกำหนดโดยสภาวะการตรึงและคำถามในการวินิจฉัย: สเมียร์ที่ตรึงแบบเปียกจะใช้สีย้อม Papanicolaou เพื่อดูรายละเอียดของนิวเคลียส ในขณะที่สเมียร์ที่ปล่อยให้แห้งในอากาศโดยเจตนาจะใช้สีย้อม Romanowsky ซึ่งจะเน้นลักษณะของไซโตพลาสซึมและพื้นหลัง