การเตรียมสไลด์แบบแห้งในอากาศและการย้อมสีโรมานอฟสกี

การเตรียมสไลด์แบบแห้งในอากาศคือการป้ายเซลล์ทางเซลล์วิทยาที่จงใจปล่อยให้แห้งในอากาศแทนที่จะตรึงด้วยของเหลว และย้อมด้วยสีย้อมตระกูลโรมานอฟสกี (เช่น May-Grunwald-Giemsa หรือ Diff-Quik แบบรวดเร็ว) วิธีการนี้ซึ่งสืบทอดมาจากโลหิตวิทยา ทำให้เซลล์แบนและขยายใหญ่ขึ้น และเน้นแกรนูลในไซโตพลาสซึม สารคัดหลั่ง และพื้นหลังของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน ซึ่งเป็นลักษณะที่เสริมรายละเอียดของนิวเคลียสที่ได้จากการย้อม Papanicolaou แบบตรึงด้วยของเหลว วิธีการนี้มีคุณค่าอย่างยิ่งในการตรวจเซลล์วิทยาจากการเจาะดูดด้วยเข็มเล็ก (fine-needle aspiration cytology)

Definition

การเตรียมสไลด์แบบแห้งในอากาศคือการป้ายเซลล์ทางเซลล์วิทยาที่ทำให้แห้งในอากาศก่อนการย้อมสี และดำเนินการด้วยสีย้อมชนิดโรมานอฟสกี ซึ่งเป็นส่วนผสมของสีย้อมอะซูร์ (เบสิก) และอีโอซิน (กรด) เพื่อเน้นลักษณะของไซโตพลาสซึม สารคัดหลั่ง และพื้นหลังสำหรับการแปลผลด้วยกล้องจุลทรรศน์

Scope

บทความนี้ครอบคลุมขั้นตอนการทำให้แห้งในอากาศ เคมีและลักษณะที่ปรากฏของสีย้อมโรมานอฟสกี และวิธีการเตรียมสไลด์นี้เสริมวัสดุ Papanicolaou ที่ตรึงด้วยของเหลวในการตรวจเซลล์วิทยาจากการเจาะดูด บทความนี้เป็นข้อมูลอ้างอิงเกี่ยวกับวิธีการและไม่มีคำแนะนำเฉพาะสำหรับผู้ป่วย

Key concepts

• การทำให้แห้งในอากาศโดยเจตนาแทนการตรึงด้วยของเหลว
• สีย้อมโรมานอฟสกี: ส่วนผสมสีย้อมอะซูร์-อีโอซิน
• May-Grunwald-Giemsa และ Diff-Quik แบบรวดเร็ว
• เมทาโครมาเซียของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันและสารคัดหลั่ง
• การแบนราบและการขยายตัวของเซลล์ที่ปรากฏ
• การเสริมกันกับสีย้อม Papanicolaou
• ความเหมาะสมสำหรับการเจาะดูดด้วยเข็มเล็กและการประเมิน ณ จุดตรวจ

Mechanisms

เมื่อปล่อยให้สไลด์แห้ง เซลล์จะแบนราบลงบนสไลด์และกระจายตัว ทำให้ดูใหญ่กว่าเซลล์ที่ตรึงด้วยของเหลว การทำให้แห้งนี้ทำหน้าที่เป็นขั้นตอนการเตรียมสำหรับการย้อมสีโรมานอฟสกี สีย้อมโรมานอฟสกีเป็นการรวมกันของสีย้อมอะซูร์ที่เป็นเบส ซึ่งจับกับโครงสร้างที่เป็นกรด เช่น กรดนิวคลีอิกและแกรนูล กับอีโอซินที่เป็นกรด ซึ่งจับกับโปรตีนในไซโตพลาสซึมที่เป็นเบส ปฏิกิริยาของสีย้อมเหล่านี้ทำให้เกิดสเปกตรัมสีที่เป็นลักษณะเฉพาะ ได้แก่ โครมาตินสีม่วงน้ำเงิน ไซโตพลาสซึมสีชมพูแดง และการย้อมติดสีแบบเมทาโครมาติกของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน เมือก และแกรนูลของสารคัดหลั่ง ซึ่งทำให้พื้นหลังและสารในไซโตพลาสซึมเด่นชัด การศึกษาเพื่อสร้างมาตรฐานได้ระบุส่วนผสมของอะซูร์ B-อีโอซิน Y ที่กำหนดไว้ว่าเป็นสีย้อมโรมานอฟสกี-กิมซาอ้างอิง เพื่อลดความแปรปรวนระหว่างสูตรต่างๆ (Wittekind 1982) สีย้อมแบบรวดเร็ว เช่น Diff-Quik ช่วยให้สามารถย้อมและอ่านสไลด์ได้ภายในไม่กี่นาที ซึ่งสนับสนุนการประเมินความเพียงพอของสิ่งส่งตรวจ ณ จุดตรวจ (Koss & Melamed 2006; Bibbo & Wilbur 2014)

Clinical relevance

การเตรียมสไลด์โรมานอฟสกีแบบแห้งในอากาศเป็นส่วนเสริมตามปกติของสไลด์ที่ย้อม Papanicolaou ในการเจาะดูดด้วยเข็มเล็ก ซึ่งช่วยในการจำแนกลักษณะของไซโตพลาสซึม ผลิตภัณฑ์จากสารคัดหลั่ง และพื้นหลัง และช่วยให้สามารถประเมินผลได้อย่างรวดเร็ว ณ จุดตรวจ บทความนี้อธิบายวิธีการและสิ่งที่เปิดเผยในฐานะพื้นฐานสำหรับการทำความเข้าใจการปฏิบัติงานทางเซลล์วิทยา ไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการตัดสินใจทางคลินิกส่วนบุคคล

Evidence & guidelines

ตำราเซลล์วิทยาอ้างอิงนำเสนอวิธีการเตรียมสไลด์โรมานอฟสกีแบบแห้งในอากาศและ Papanicolaou แบบตรึงด้วยของเหลวว่าเป็นส่วนเสริมกันโดยเจตนา โดยมีโปรโตคอลการเจาะดูดหลายอย่างที่เตรียมทั้งสองวิธี เพื่อให้ลักษณะของไซโตพลาสซึมและพื้นหลัง รวมถึงรายละเอียดของนิวเคลียสแสดงผลได้ดี (Koss & Melamed 2006; Bibbo & Wilbur 2014) วรรณกรรมทางเคมีได้กำหนดส่วนผสมสีย้อมโรมานอฟสกีที่ได้มาตรฐานเพื่อให้สีย้อมสามารถทำซ้ำได้ในห้องปฏิบัติการต่างๆ (Wittekind 1982)

History

สีย้อมชนิดโรมานอฟสกีเกิดขึ้นในปลายศตวรรษที่สิบเก้าในสาขาโลหิตวิทยาและการตรวจมาลาเรียด้วยกล้องจุลทรรศน์ จากการค้นพบว่าเมทิลีนบลูที่เก่าหรือผ่านการโพลีโครมิกเมื่อรวมกับอีโอซินจะสร้างสีใหม่ (ปรากฏการณ์โรมานอฟสกี) ซึ่งต่อมาได้รับการปรับปรุงโดย Giemsa และคนอื่นๆ เซลล์วิทยาได้นำสีย้อมเหล่านี้มาใช้สำหรับการป้ายเซลล์แบบแห้งในอากาศเพื่อเสริมสีย้อม Papanicolaou แบบตรึงด้วยของเหลว และงานสร้างมาตรฐานในศตวรรษที่ยี่สิบได้พยายามหาสูตรสีย้อมที่สามารถทำซ้ำได้ (Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006)

Key figures

• Dmitri Romanowsky
• Gustav Giemsa
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

เหตุใดการป้ายเซลล์ทางเซลล์วิทยาบางชนิดจึงทำให้แห้งในอากาศแทนที่จะตรึงด้วยของเหลว?

การทำให้แห้งในอากาศเป็นสถานะการเตรียมที่จำเป็นสำหรับสีย้อมโรมานอฟสกี ซึ่งเน้นแกรนูลในไซโตพลาสซึม สารคัดหลั่ง และพื้นหลังของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน ลักษณะเหล่านี้เสริมรายละเอียดของนิวเคลียสที่เห็นบนสไลด์ Papanicolaou ที่ตรึงด้วยของเหลว ดังนั้นมักจะเตรียมทั้งสองวิธีจากสิ่งส่งตรวจเดียวกัน

ความสัมพันธ์ระหว่างสีย้อมโรมานอฟสกีและ Diff-Quik คืออะไร?

Diff-Quik เป็นสีย้อมชนิดโรมานอฟสกีเชิงพาณิชย์แบบรวดเร็ว เช่นเดียวกับสีย้อมโรมานอฟสกีอื่นๆ Diff-Quik ใช้สีย้อมอะซูร์และอีโอซินบนสไลด์ที่แห้งในอากาศ แต่ได้รับการคิดค้นสูตรเพื่อความรวดเร็ว ทำให้สามารถย้อมและอ่านสไลด์ได้ภายในไม่กี่นาทีสำหรับการประเมิน ณ จุดตรวจ