การเก็บและการเตรียมสิ่งส่งตรวจ
การเก็บและการเตรียมสิ่งส่งตรวจเป็นรากฐานก่อนการวิเคราะห์ทางเซลล์พยาธิวิทยา: เป็นชุดของเทคนิคที่ใช้ในการเก็บรวบรวมวัสดุเซลล์จากร่างกายและนำมาจัดเตรียมบนสไลด์ เพื่อให้สามารถตรวจเซลล์แต่ละเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ได้ เนื่องจากการวินิจฉัยทางเซลล์วิทยาอาศัยสัณฐานวิทยาของเซลล์และกลุ่มเซลล์ขนาดเล็กมากกว่าโครงสร้างเนื้อเยื่อที่สมบูรณ์ วิธีการเก็บตัวอย่าง การถ่ายโอน การตรึง และการย้อมสีจึงเป็นปัจจัยสำคัญที่กำหนดว่าการวินิจฉัยที่น่าเชื่อถือจะสามารถทำได้หรือไม่
Definition
การเก็บและการเตรียมสิ่งส่งตรวจประกอบด้วยขั้นตอนการเตรียมทางเซลล์วิทยา ได้แก่ การเก็บตัวอย่าง การถ่ายโอนไปยังสไลด์หรือสารตรึง การตรึง และการย้อมสี ซึ่งจะเปลี่ยนตัวอย่างทางเซลล์วิทยาทางคลินิกให้เป็นสไลด์กล้องจุลทรรศน์ที่เหมาะสมสำหรับการตีความทางสัณฐานวิทยา
Scope
ส่วนนี้จะแนะนำผู้อ่านให้รู้จักกับวิธีการเตรียมหลักที่ใช้ในเซลล์วิทยา: การป้ายแบบธรรมดาโดยตรง, การเตรียมแบบอาศัยของเหลว, กลยุทธ์การตรึง, และการย้อมสีที่สำคัญสองแบบ (การย้อมสี Papanicolaou ที่ตรึงด้วยแอลกอฮอล์ และการย้อมสี Romanowsky ที่ปล่อยให้แห้งในอากาศ) โดยจะนำเสนอสิ่งเหล่านี้ในฐานะวิธีการทางห้องปฏิบัติการที่ส่งผลต่อความเพียงพอและความสามารถในการตีความของสิ่งส่งตรวจ ไม่ใช่คู่มือขั้นตอนการปฏิบัติงานและไม่ได้ให้คำแนะนำเฉพาะสำหรับผู้ป่วย
Sub-topics
Key concepts
- ระยะก่อนการวิเคราะห์ทางเซลล์วิทยา
- ความเพียงพอของสิ่งส่งตรวจและปริมาณเซลล์
- การป้ายแบบธรรมดาเทียบกับการเตรียมแบบอาศัยของเหลว
- การตรึงแบบเปียกเทียบกับการปล่อยให้แห้งในอากาศ
- การย้อมสี Papanicolaou และการย้อมสี Romanowsky
- การตรึง, ความโปร่งใส, และรายละเอียดของนิวเคลียส
- สิ่งแปลกปลอมจากการแห้ง
Mechanisms
ตัวอย่างทางเซลล์วิทยาเริ่มต้นจากเซลล์ที่แขวนลอยอยู่ในของเหลวหรือถูกขูดลงบนเครื่องมือ ในการเตรียมแบบธรรมดา วัสดุจะถูกป้ายโดยตรงลงบนสไลด์แก้วและตรึงทันที (ตรึงแบบเปียก) สำหรับการย้อมสี Papanicolaou หรือปล่อยให้แห้งในอากาศสำหรับการย้อมสี Romanowsky ในเซลล์วิทยาแบบอาศัยของเหลว ตัวอย่างจะถูกล้างลงในของเหลวกันเสียแทน และเครื่องมือจะวางเซลล์ชั้นเดียวที่บางและสม่ำเสมอลงบนสไลด์ ซึ่งช่วยลดการบดบังจากเลือด เมือก และการทับซ้อนกัน (Arbyn 2008) การตรึงจะช่วยให้โปรตีนของเซลล์คงตัวและรักษารายละเอียดของโครมาตินในนิวเคลียส จากนั้นขั้นตอนการย้อมสีจะให้สีและความคมชัดที่ช่วยให้อ่านนิวเคลียส ไซโตพลาสซึม และพื้นหลังได้ การเลือกวิธีการเตรียมและการย้อมสีจะขึ้นอยู่กับคำถามในการวินิจฉัย – การย้อมสี Papanicolaou เหมาะสำหรับรายละเอียดของนิวเคลียสและโครมาตินในเซลล์เยื่อบุผิว ในขณะที่การย้อมสี Romanowsky ที่แห้งในอากาศจะเน้นลักษณะของไซโตพลาสซึมและเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน ซึ่งมีประโยชน์ในการตรวจเซลล์จากการเจาะดูด (Papanicolaou 1942; Koss & Melamed 2006)
Clinical relevance
ความเพียงพอและคุณภาพของสิ่งส่งตรวจทางเซลล์วิทยาเป็นตัวกำหนดขีดจำกัดสูงสุดของความแม่นยำในการวินิจฉัย ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมการเตรียมสิ่งส่งตรวจจึงเป็นส่วนสำคัญที่เซลล์วิทยามีส่วนช่วยในการคัดกรองและการวินิจฉัย ส่วนนี้จะอธิบายถึงวิธีการผลิตวัสดุทางเซลล์วิทยาที่น่าเชื่อถือ และมีวัตถุประสงค์เพื่อเป็นพื้นฐานในการทำความเข้าใจการปฏิบัติงานในห้องปฏิบัติการ ไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการตัดสินใจทางคลินิกเฉพาะบุคคล
Evidence & guidelines
หลักฐานเชิงเปรียบเทียบสำหรับวิธีการเตรียมสิ่งส่งตรวจมีการพัฒนามากที่สุดในการคัดกรองมะเร็งปากมดลูก ซึ่งการทบทวนอย่างเป็นระบบพบว่าเซลล์วิทยาแบบอาศัยของเหลวและแบบธรรมดามีความแม่นยำใกล้เคียงกันโดยรวม ในขณะที่การเตรียมแบบอาศัยของเหลวช่วยลดจำนวนสิ่งส่งตรวจที่ไม่น่าพอใจ (Arbyn 2008; Siebers 2012, อ้างอิงในหัวข้อเซลล์วิทยาแบบอาศัยของเหลว) กรอบการรายงานเช่นระบบ Bethesda ได้รวมเกณฑ์ความเพียงพอของสิ่งส่งตรวจที่ชัดเจนซึ่งขึ้นอยู่กับคุณภาพของการเตรียมโดยตรง (Solomon 2002, อ้างอิงในหัวข้อที่เกี่ยวข้อง)
History
การเตรียมเซลล์วิทยาที่ทันสมัยพัฒนามาจากการพัฒนาการย้อมสีหลายสีสำหรับสเมียร์ที่ตรึงโดย George Papanicolaou ในช่วงต้นศตวรรษที่ 20 ซึ่งทำให้การคัดกรองมะเร็งปากมดลูกในระดับประชากรเป็นไปได้ การป้ายโดยตรงและการตรึงด้วยแอลกอฮอล์เป็นวิธีปฏิบัติที่แพร่หลายมานานหลายทศวรรษ ตั้งแต่ทศวรรษ 1990 วิธีการแบบอาศัยของเหลวได้นำเสนอการเตรียมเซลล์ชั้นเดียวที่เป็นมาตรฐาน และสาขายังคงรวมการทดสอบระดับโมเลกุลและการทดสอบเสริมเข้ากับวัสดุสิ่งส่งตรวจที่เหลืออยู่ (Koss & Melamed 2006; Bibbo & Wilbur 2014)
Key figures
- George Papanicolaou
- Leopold Koss
Related topics
Seminal works
- papanicolaou-1942
- arbyn-2008
- koss-melamed-2006
Frequently asked questions
- ความแตกต่างระหว่างการเก็บสิ่งส่งตรวจและการเตรียมสิ่งส่งตรวจในเซลล์วิทยาคืออะไร?
- การเก็บคือการได้มาซึ่งตัวอย่างเซลล์จากผู้ป่วย; การเตรียมคือกระบวนการในห้องปฏิบัติการ – การถ่ายโอนไปยังสไลด์หรือของเหลว, การตรึง, และการย้อมสี – ที่เปลี่ยนตัวอย่างนั้นให้เป็นสไลด์กล้องจุลทรรศน์ที่สามารถอ่านได้ ทั้งสองเป็นส่วนหนึ่งของระยะก่อนการวิเคราะห์ที่ควบคุมคุณภาพของสิ่งส่งตรวจ
- ทำไมตัวอย่างเซลล์วิทยาจึงต้องถูกตรึงหรือปล่อยให้แห้งในอากาศก่อนการย้อมสี?
- การตรึงหรือการปล่อยให้แห้งในอากาศอย่างควบคุมจะช่วยรักษาสภาพโครงสร้างของเซลล์และเตรียมเซลล์ให้ดูดซับสีย้อมได้อย่างสม่ำเสมอ การตรึงแบบเปียกช่วยสนับสนุนการย้อมสีที่เน้นรายละเอียดของนิวเคลียส เช่น การย้อมสี Papanicolaou ในขณะที่การปล่อยให้แห้งในอากาศโดยเจตนาเป็นขั้นตอนการเตรียมสำหรับการย้อมสี Romanowsky