การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงและโดยอ้อม (คูมบ์ส)

การทดสอบแอนติโกลบูลิน หรือที่เรียกกันทั่วไปว่าการทดสอบคูมบ์ส ใช้รีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลินเพื่อตรวจหาอิมมูโนโกลบูลินหรือคอมพลีเมนต์ที่จับกับเซลล์เม็ดเลือดแดง รูปแบบโดยตรงจะเผยให้เห็นแอนติบอดีที่เคลือบเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยอยู่แล้วในร่างกาย (in vivo) ในขณะที่รูปแบบโดยอ้อมจะตรวจหาแอนติบอดีในพลาสมาที่จับกับเซลล์รีเอเจนต์ในหลอดทดลอง (in vitro) ซึ่งทั้งสองอย่างนี้เป็นเครื่องมือสำคัญในสาขาโลหิตวิทยาภูมิคุ้มกัน

Definition

การทดสอบแอนติโกลบูลิน (คูมบ์ส) ตรวจหาอิมมูโนโกลบูลินของมนุษย์หรือส่วนประกอบของคอมพลีเมนต์บนเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยใช้รีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลินที่เชื่อมโยงเซลล์ที่ถูกเคลือบเข้าด้วยกันเป็นกลุ่มเม็ดเลือดแดงที่มองเห็นได้ การทดสอบโดยตรงจะตรวจเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยเอง และการทดสอบโดยอ้อมจะตรวจเซลล์เม็ดเลือดแดงรีเอเจนต์หลังจากบ่มกับพลาสมาของผู้ป่วย

Scope

หัวข้อนี้จะอธิบายหลักการของปฏิกิริยาแอนติโกลบูลิน และความแตกต่างระหว่างการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรง (DAT) และการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยอ้อม (IAT) รวมถึงบทบาทของแต่ละการทดสอบในการตรวจทางซีรัมวิทยา โดยจะอธิบายวิธีการทดสอบและการแปลผลในเชิงแนวคิด และไม่ใช่ระเบียบปฏิบัติสำหรับการวินิจฉัยหรือการจัดการผู้ป่วยเฉพาะราย

Core questions

• รีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลินทำให้เซลล์ที่ถูกเคลือบด้วยแอนติบอดีจับกลุ่มกันได้อย่างไร?
• อะไรคือความแตกต่างระหว่างการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงและโดยอ้อม?
• ผลบวกของการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงบ่งชี้อะไร?
• การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยอ้อมถูกนำมาใช้ในการตรวจหาแอนติบอดีและการจับคู่เลือดอย่างไร?

Key concepts

• รีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลิน (AHG)
• แอนติบอดีไม่สมบูรณ์ (IgG)
• การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรง (DAT)
• การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยอ้อม (IAT)
• การกระตุ้นในร่างกาย (in vivo) เทียบกับการกระตุ้นในหลอดทดลอง (in vitro)
• รีเอเจนต์โพลีสเปซิฟิกและโมโนสเปซิฟิก (IgG, C3)
• การจับกลุ่มเป็นผลลัพธ์ที่อ่านได้

Mechanisms

แอนติบอดีต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงหลายชนิดที่มีความสำคัญทางคลินิกเป็นชนิด IgG และไม่สามารถทำให้เซลล์ที่มีแอนติเจนเป็นบวกจับกลุ่มกันได้โดยตรงในน้ำเกลือ เนื่องจากโมเลกุลมีขนาดเล็กเกินไปที่จะเชื่อมเซลล์ที่ผลักกันด้วยประจุบนพื้นผิว รีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลิน ซึ่งสร้างขึ้นเพื่อต่อต้าน IgG และคอมพลีเมนต์ของมนุษย์ จะจับกับโมเลกุลที่เคลือบเหล่านี้และเชื่อมเซลล์ที่ถูกกระตุ้นที่อยู่ใกล้เคียงกัน ทำให้เกิดการจับกลุ่มที่มองเห็นได้ ในการทดสอบโดยตรง เซลล์เม็ดเลือดแดงที่ล้างแล้วจากผู้ป่วยจะถูกผสมกับรีเอเจนต์เพื่อตรวจหาแอนติบอดีหรือคอมพลีเมนต์ที่จับอยู่แล้วในร่างกาย (in vivo) เช่นที่เกิดขึ้นในปฏิกิริยาการถ่ายเลือดที่เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก โรคเม็ดเลือดแดงแตกในทารกแรกเกิด และภาวะโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิคุ้มกันตนเอง ในการทดสอบโดยอ้อม พลาสมาจะถูกบ่มกับเซลล์เม็ดเลือดแดงรีเอเจนต์ก่อน เพื่อให้แอนติบอดีจับกันในหลอดทดลอง (in vitro) จากนั้นจึงเติมรีเอเจนต์แอนติโกลบูลิน ซึ่งเป็นพื้นฐานของการคัดกรองแอนติบอดี การระบุแอนติบอดี และการจับคู่เลือดด้วยแอนติโกลบูลิน

Clinical relevance

การทดสอบแอนติโกลบูลินสนับสนุนการตรวจทางห้องปฏิบัติการของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกและการเลือกส่วนประกอบของเลือดที่ปลอดภัย รายการนี้อธิบายว่าการทดสอบทำงานอย่างไรและผลบวกและผลลบบ่งชี้อะไรโดยหลักการ การแปลผลแต่ละรายการขึ้นอยู่กับบริบททางคลินิกและห้องปฏิบัติการ และไม่ได้กล่าวถึงในที่นี้เพื่อเป็นแนวทาง

Evidence & guidelines

เทคนิคแอนติโกลบูลินและรูปแบบต่างๆ ได้รับการอธิบายไว้ในเอกสารอ้างอิงโลหิตวิทยาภูมิคุ้มกันมาตรฐาน เช่น AABB Technical Manual และ Mollison's Blood Transfusion in Clinical Medicine ซึ่งกำหนดวิธีการและตีความโดยฉันทามติ

History

คูมบ์ส, มูแรนต์ และเรซ ได้นำเสนอการทดสอบแอนติโกลบูลินในปี 1945 เพื่อตรวจหาแอนติบอดี Rh ที่อ่อนแอและไม่สมบูรณ์ซึ่งการจับกลุ่มด้วยน้ำเกลือธรรมดาไม่สามารถตรวจพบได้ เทคนิคนี้ได้เปลี่ยนแปลงโลหิตวิทยาภูมิคุ้มกันโดยทำให้การกระตุ้นด้วย IgG สามารถมองเห็นได้ และยังคงเป็นพื้นฐานของการคัดกรองแอนติบอดี การระบุแอนติบอดี การจับคู่เลือด และการตรวจสอบภาวะเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิคุ้มกัน

Key figures

• Robert Coombs
• Arthur Mourant
• Robert Race

Seminal works

• coombs-1945
• mollison-2014
• daniels-2013

Frequently asked questions

อะไรคือความแตกต่างระหว่างการทดสอบคูมบ์สโดยตรงและโดยอ้อม?

การทดสอบโดยตรงจะตรวจหาแอนติบอดีหรือคอมพลีเมนต์ที่จับกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยในร่างกายอยู่แล้ว; การทดสอบโดยอ้อมจะตรวจหาแอนติบอดีในพลาสมาโดยการจับกับเซลล์เม็ดเลือดแดงรีเอเจนต์ในหลอดทดลองก่อนที่จะเติมรีเอเจนต์แอนติโกลบูลิน

อะไรที่ทำให้ผลการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงเป็นบวกได้?

ผลบวกของการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงบ่งชี้ว่าเซลล์เม็ดเลือดแดงถูกเคลือบด้วยอิมมูโนโกลบูลินหรือคอมพลีเมนต์ ซึ่งอาจเกิดขึ้นในภาวะโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิคุ้มกันตนเอง โรคเม็ดเลือดแดงแตกในทารกแรกเกิด และปฏิกิริยาการถ่ายเลือดที่เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก รวมถึงสถานการณ์อื่นๆ