Técnicas Citogenéticas e FISH

As técnicas citogenéticas examinam os cromossomos em busca de anormalidades numéricas e estruturais, enquanto a hibridização fluorescente in situ (FISH) utiliza sondas de DNA marcadas para iluminar sequências específicas diretamente dentro das células ou em extensões cromossômicas. Juntas, elas unem a análise de cromossomos inteiros e a detecção molecular sequência-específica.

Definition

As técnicas citogenéticas e FISH são métodos que detectam e localizam anormalidades cromossômicas e sequências específicas de DNA dentro das células, com a FISH utilizando sondas de ácido nucleico marcadas fluorescentemente que se hibridizam a sequências-alvo complementares.

Scope

O tópico abrange o cariotipagem convencional, FISH para sondas específicas de locus e cromossomos, e hibridização genômica comparativa para avaliação de número de cópias em todo o genoma. Ele trata estas como material de referência metodológico sobre como as alterações cromossômicas e subcromossômicas são visualizadas, e não como orientação para testes clínicos.

Key concepts

• Cariotipagem
• Hibridização fluorescente in situ (FISH)
• Sondas específicas de locus e centroméricas
• Rearranjos cromossômicos e aneuploidia
• Hibridização genômica comparativa (CGH)
• Ganhos e perdas de número de cópias
• Análise de interfase versus metáfase

Mechanisms

A citogenética convencional detém as células em divisão na metáfase, espalha e cora os cromossomos, e lê o padrão de bandas para detectar anormalidades numéricas e estruturais. A FISH, por sua vez, aplica sondas de DNA de fita simples marcadas fluorescentemente que se hibridizam às suas sequências-alvo complementares em células fixadas; a sonda ligada é visualizada por microscopia de fluorescência, localizando uma sequência em um cromossomo ou núcleo interfásico (Pinkel et al., 1986). A hibridização genômica comparativa estende este princípio para o genoma inteiro co-hibridizando DNA de teste e referência diferencialmente marcados e comparando suas razões de fluorescência para mapear ganhos e perdas de número de cópias (Kallioniemi et al., 1992).

Clinical relevance

Estas técnicas são utilizadas para detectar anormalidades cromossômicas e rearranjos estruturais relevantes para distúrbios constitucionais e adquiridos. Esta entrada descreve como os métodos visualizam cromossomos e sequências como referência; não fornece orientação sobre como solicitar ou interpretar qualquer teste citogenético específico no cuidado ao paciente.

Evidence & guidelines

Os métodos baseiam-se em estudos primários fundamentais que introduziram a hibridização fluorescente de alta sensibilidade (Pinkel et al., 1986) e a hibridização genômica comparativa para tumores sólidos (Kallioniemi et al., 1992). Padrões detalhados de ensaio e relatórios são mantidos por órgãos profissionais de citogenética e são referenciados na prática laboratorial.

History

A citogenética humana amadureceu em meados do século XX com a contagem e o bandeamento cromossômico confiáveis. A introdução da hibridização fluorescente in situ quantitativa e de alta sensibilidade em 1986 adicionou resolução sequência-específica à análise cromossômica (Pinkel et al., 1986), e a hibridização genômica comparativa em 1992 tornou possíveis os levantamentos de número de cópias em todo o genoma (Kallioniemi et al., 1992), pressagiando os métodos atuais baseados em arrays e sequenciamento para número de cópias.

Key figures

• Daniel Pinkel
• Joe W. Gray
• Anne Kallioniemi

Seminal works

• pinkel-1986
• kallioniemi-1992

Frequently asked questions

O que a FISH adiciona à cariotipagem convencional?

A cariotipagem mostra cromossomos inteiros e grandes alterações estruturais, enquanto a FISH usa sondas marcadas para detectar sequências ou rearranjos específicos, inclusive em células interfásicas não-divididas onde um cariótipo completo não pode ser feito.

Como a hibridização genômica comparativa detecta alterações no número de cópias?

Ela co-hibridiza DNA de teste e referência diferencialmente marcados ao mesmo alvo e compara suas razões de fluorescência; regiões onde o sinal de teste é relativamente maior ou menor indicam ganhos ou perdas genômicas.