شمارش لنفوسیتها و فلوسیتومتری در ارزیابی ایمنی
لنفوسیتها ایمنی تطبیقی را انجام میدهند و تعداد و ترکیب زیرمجموعههای آنها برای ارزیابی وضعیت ایمنی محوری است. فلوسیتومتری روش اصلی آزمایشگاهی برای شمارش لنفوسیتها و شناسایی زیرمجموعههای آنها بر اساس نشانگرهایی است که بیان میکنند، و آن را به ابزاری کلیدی برای ارزیابی ایمنی و شناسایی بیماریهای لنفاوی تبدیل میکند.
Definition
شمارش لنفوسیتها اندازهگیری کمی لنفوسیتها و زیرمجموعههای آنها است؛ فلوسیتومتری تکنیکی است که خواص فیزیکی و فلورسنت سلولهای معلق را برای شناسایی و شمارش جمعیتها بر اساس ایمونوفنوتایپ آنها اندازهگیری میکند.
Scope
این موضوع به شمارش لنفوسیتها و ایمونوفنوتایپینگ با فلوسیتومتری میپردازد: اندازهگیری کل لنفوسیتها و زیرمجموعههای آنها (مانند سلولهای T، B و سلولهای کشنده طبیعی)، استفاده از شمارش سلولهای T CD4 به عنوان شاخصی از وضعیت ایمنی، و نقش پنلهای آنتیبادی استاندارد شده در شناسایی جمعیتهای لنفاوی واکنشی و نئوپلاستیک. این یک توصیف مرجع از روش و کاربردهای آن است، نه راهنمایی بالینی یا تفسیری برای هیچ فرد خاصی.
Core questions
- فلوسیتومتری چگونه زیرمجموعههای لنفوسیتها را شناسایی و شمارش میکند؟
- شمارش سلولهای T CD4 چه چیزی را نشان میدهد و چگونه به طور قابل اعتماد اندازهگیری میشود؟
- پنلهای آنتیبادی استاندارد شده چگونه قابلیت تکرار ایمونوفنوتایپینگ را بهبود میبخشند؟
- فلوسیتومتری چگونه برای تمایز جمعیتهای لنفاوی واکنشی از نئوپلاستیک استفاده میشود؟
Key concepts
- اصول فلوسیتومتری (پراکندگی نور و فلورسانس)
- ایمونوفنوتایپینگ و نشانگرهای CD
- زیرمجموعههای لنفوسیت (سلولهای T، B، NK)
- شمارش سلولهای T CD4
- شمارش تکپلتفرمی در مقابل دوپلتفرمی
- استراتژی گیتینگ
- پنلهای آنتیبادی استاندارد شده (EuroFlow)
- ارزیابی کلونالیته
Mechanisms
در فلوسیتومتری، سلولهای معلق به صورت تکفایل از یک یا چند پرتو لیزر عبور میکنند؛ پراکندگی نور رو به جلو و جانبی، اندازه و پیچیدگی سلول را گزارش میدهد، در حالی که آنتیبادیهای کونژوگه شده با فلوروکروم که به آنتیژنهای سطحی یا درونسلولی متصل شدهاند، نشانگرهایی را که یک سلول بیان میکند، گزارش میدهند. با ترکیب نشانگرها و اعمال یک استراتژی گیتینگ، جمعیتهایی مانند سلولهای T CD4 و CD8، سلولهای B و سلولهای کشنده طبیعی شناسایی و شمارش میشوند (Maecker 2015). شمارشها را میتوان در یک پلتفرم واحد (سلولها در هر حجم به طور مستقیم) یا با ترکیب درصدها با یک شمارش سلولی جداگانه به دست آورد؛ رویکرد تکپلتفرمی معمولاً برای دقت در شمارش CD4 ترجیح داده میشود (Whitby 2013). پنلهای آنتیبادی استاندارد و معتبر – مانند پنلهای EuroFlow – ایمونوفنوتایپینگ را در آزمایشگاههای مختلف قابل تکرار میسازند و از شناسایی جمعیتهای لنفاوی غیرطبیعی یا کلونال حمایت میکنند، که به طبقهبندی نئوپلاسمهای لنفاوی کمک میکند (van Dongen 2012; Swerdlow 2016).
Clinical relevance
شمارش لنفوسیتها اساس ارزیابی وضعیت ایمنی را تشکیل میدهد – برای مثال، شمارش سلولهای T CD4 یک شاخص دیرینه در زمینه عفونت HIV است – و ایمونوفنوتایپینگ جزء جداییناپذیری از شناسایی اختلالات لنفوپرولیفراتیو و نقص ایمنی است. این مدخل نحوه عملکرد روش و آنچه را که در سطح جمعیت و آزمایشگاهی اندازهگیری میکند، توضیح میدهد؛ این مبنایی برای تشخیص، مرحلهبندی یا درمان فردی نیست.
Evidence & guidelines
ایمونوفنوتایپینگ قابل تکرار توسط پنلهای آنتیبادی استاندارد شده (van Dongen 2012) و راهنماییهای اجماعی در مورد فلوسیتومتری و ماسسیتومتری برای پایش ایمنی (Maecker 2015) پشتیبانی میشود. مطالعات روششناختی محدودیتهای اندازهگیری شمارش CD4 و مزیت شمارش تکپلتفرمی را تعریف میکنند (Whitby 2013)، و دستهبندیهای ایمونوفنوتایپی به طبقهبندی نئوپلاسمهای لنفاوی سازمان بهداشت جهانی کمک میکنند (Swerdlow 2016).
Debates
- شمارش CD4 تکپلتفرمی در مقابل دوپلتفرمی
- روشهای تکپلتفرمی شمارش مطلق را مستقیماً به دست میآورند و معمولاً خطای کمتری نسبت به رویکردهای دوپلتفرمی که درصدی را با یک شمارش سلولی جداگانه ترکیب میکنند، نشان میدهند، که بر روی روش توصیه شده برای شمارش CD4 تأثیر گذاشته است.
Related topics
Seminal works
- vandongen-2012
- maecker-2015
- swerdlow-2016
Frequently asked questions
- شمارش CD4 چه چیزی را اندازهگیری میکند؟
- شمارش CD4 تعداد لنفوسیتهای T بیانکننده نشانگر CD4 را اندازهگیری میکند، معمولاً در هر میکرولیتر خون؛ از آن به عنوان شاخصی از وضعیت ایمنی استفاده میشود، به طور کلاسیک در شرایط عفونت HIV.
- فلوسیتومتری چگونه انواع لنفوسیتها را از هم تشخیص میدهد؟
- آنتیبادیهای نشاندار شده با رنگهای فلورسنت به نشانگرهای سطحی خاصی متصل میشوند، و سیتومتر تشخیص میدهد که هر سلول کدام نشانگرها را حمل میکند، که امکان تمایز و شمارش جمعیتهایی مانند سلولهای T، سلولهای B و سلولهای کشنده طبیعی را فراهم میکند.