سیتوشیمی و فلوسیتومتری در لوسمی

سیتوشیمی و فلوسیتومتری تکنیک‌های آزمایشگاهی هستند که تشخیص لوسمی را از یک برداشت مورفولوژیک به یک رده و ایمونوفنوتیپ مشخص تبدیل می‌کنند. رنگ‌آمیزی‌های سیتوشیمیایی خواص آنزیمی و متابولیکی سلول‌های لوسمیک را آشکار می‌سازند، در حالی که فلوسیتومتری چندپارامتری به طور همزمان بسیاری از نشانگرهای سطحی و درون‌سلولی را اندازه‌گیری می‌کند و به این ترتیب رده سلولی را تعیین کرده و بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری را شناسایی می‌کند.

Definition

سیتوشیمی و فلوسیتومتری روش‌های آزمایشگاهی برای شناسایی سلول‌های لوسمیک هستند: سیتوشیمی از رنگ‌هایی استفاده می‌کند که ویژگی‌های آنزیمی یا بیوشیمیایی (به عنوان مثال فعالیت میلوپراکسیداز) را آشکار می‌سازند، و فلوسیتومتری چندپارامتری چندین آنتی‌ژن سطحی و درون‌سلولی را در هر سلول اندازه‌گیری می‌کند تا رده سلولی را تعیین کند، ایمونوفنوتیپ را تعریف کند و بیماری باقیمانده را کمی‌سازی کند.

Scope

این موضوع به روش‌های مورد استفاده برای شناسایی سلول‌های لوسمیک فراتر از مورفولوژی می‌پردازد: رنگ‌آمیزی‌های سیتوشیمیایی کلاسیک مانند میلوپراکسیداز، و ایمونوفنوتیپینگ فلوسیتومتریک چندپارامتری مدرن، شامل پنل‌های آنتی‌بادی استاندارد شده و تشخیص بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری (مینیمال). این یک مطلب مرجع در مورد روش‌شناسی آزمایشگاهی است، نه یک پروتکل بالینی.

Key concepts

• میلوپراکسیداز و سایر رنگ‌آمیزی‌های سیتوشیمیایی
• تعیین رده سلولی با ایمونوفنوتیپ
• فلوسیتومتری چندپارامتری (چند رنگی)
• پنل‌های آنتی‌بادی استاندارد شده
• بیان آنتی‌ژن غیرطبیعی
• گیتینگ و تحلیل جمعیت سلولی
• تشخیص بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری (مینیمال)

Mechanisms

رنگ‌آمیزی‌های سیتوشیمیایی از آنزیم‌ها و اجزای سلول‌خاص بهره می‌برند: به عنوان مثال، فعالیت میلوپراکسیداز، رده میلوئیدی را مشخص می‌کند و به تفکیک لوسمی میلوئید حاد از لوسمی لنفوبلاستیک حاد در یک اسمیر رنگ‌آمیزی شده کمک می‌کند. فلوسیتومتری سلول‌ها را در جریانی از کنار لیزرها معلق می‌کند و پراکندگی نور و فلورسانس حاصل از نشانگرهای متصل به آنتی‌بادی را ثبت می‌کند، که امکان اندازه‌گیری بسیاری از آنتی‌ژن‌ها را در هر سلول فراهم می‌آورد؛ ترکیبات آنتی‌ژنی مشخص و غیرطبیعی، رده سلولی را تعریف کرده و جمعیت لوسمیک را شناسایی می‌کنند. همین رویکرد، که با حساسیت بالا و پنل‌های استاندارد شده به کار می‌رود، جمعیت‌های کوچک لوسمیک باقیمانده پس از درمان را به عنوان بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری شناسایی می‌کند (van Dongen و همکاران، 2012؛ Schuurhuis و همکاران، 2018).

Clinical relevance

این تکنیک‌ها زیربنای تعیین رده سلولی و ایمونوفنوتیپینگ هستند که طبقه‌بندی مدرن لوسمی به آن‌ها وابسته است، و ارزیابی بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری با فلوسیتومتری به یک نشانگر پاسخ مهم در ادبیات علمی تبدیل شده است. این مدخل روش‌ها را در سطح مرجع توصیف می‌کند و راهنمایی برای تفسیر نتایج یک بیمار خاص نیست.

Evidence & guidelines

تلاش‌های استانداردسازی مانند پنل‌های آنتی‌بادی EuroFlow، ایمونوفنوتیپینگ فلوسیتومتریک قابل تکرار را تعریف می‌کنند، و کارگروه MRD شبکه لوسمی اروپا (European LeukemiaNet) معیارهای اجماعی را برای ارزیابی بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری در لوسمی میلوئید حاد ارائه می‌دهد؛ معیارهای رده سلولی نیز در طبقه‌بندی WHO گنجانده شده‌اند (van Dongen و همکاران، 2012؛ Schuurhuis و همکاران، 2018؛ Arber و همکاران، 2016).

History

رنگ‌آمیزی سیتوشیمیایی ابزار اولیه برای اصلاح تشخیص مورفولوژیک لوسمی حاد و تعیین رده سلولی بود. سپس ایمونوفنوتیپینگ فلوسیتومتریک تا حد زیادی جایگزین سیتوشیمی برای تعیین رده سلولی شد، با اندازه‌گیری بسیاری از آنتی‌ژن‌ها در هر سلول، و ابتکارات استانداردسازی و اسناد اجماع بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری بعداً نقش آن را به ارزیابی قابل تکرار و با حساسیت بالا گسترش دادند (van Dongen و همکاران، 2012؛ Schuurhuis و همکاران، 2018).

Seminal works

• van-dongen-2012
• schuurhuis-2018

Frequently asked questions

چرا رنگ‌آمیزی میلوپراکسیداز در لوسمی حاد مفید است؟

میلوپراکسیداز نشانگر رده میلوئیدی است، بنابراین وجود آن در یک رنگ‌آمیزی سیتوشیمیایی از تشخیص لوسمی میلوئید حاد حمایت می‌کند و به تمایز آن از لوسمی لنفوبلاستیک حاد کمک می‌کند.

تشخیص بیماری باقیمانده قابل اندازه‌گیری با فلوسیتومتری چیست؟

این روش استفاده از فلوسیتومتری چندپارامتری با حساسیت بالا برای شناسایی جمعیت‌های کوچک سلول‌های لوسمیک است که پس از درمان باقی می‌مانند، در سطحی پایین‌تر از آنچه در مورفولوژی روتین قابل مشاهده است، به عنوان نشانگری از پاسخ به درمان.