Pruebas moleculares y detección de VPH en muestras citológicas

Las pruebas moleculares en muestras citológicas aplican ensayos basados en ácidos nucleicos a células obtenidas por exfoliación o aspiración, detectando dianas de ADN o ARN que revelan infección, mutaciones u otras alteraciones clínicamente relevantes. La detección del virus del papiloma humano (VPH) de alto riesgo en muestras de citología cervical es el ejemplo más extendido, mientras que la secuenciación de aspirados con aguja fina extiende el diagnóstico molecular a los tumores sólidos.

Definition

Las pruebas moleculares en muestras citológicas son la aplicación de ensayos basados en ácidos nucleicos —incluyendo la detección de ácidos nucleicos virales y la elaboración de perfiles de mutaciones tumorales— a células obtenidas por citología exfoliativa o por aspiración, o a su material residual en base líquida.

Scope

La entrada abarca el uso de material citológico y residual en base líquida como fuente de ácidos nucleicos, la detección de VPH en el cribado cervical y ensayos moleculares más amplios como la secuenciación de nueva generación en aspirados. Se trata de una visión general metodológica y de referencia y no proporciona protocolos de cribado ni guías de tratamiento.

Core questions

• ¿Qué factores preanalíticos determinan si el material citológico produce ácido nucleico adecuado para las pruebas?
• ¿Cómo complementa la detección de VPH de alto riesgo la citología cervical morfológica en el cribado?
• ¿Qué ensayos moleculares pueden realizarse en material de aspirado con aguja fina y citología residual?

Key concepts

• Extracción de ácidos nucleicos de material citológico
• Detección de VPH de alto riesgo
• Citología en base líquida como sustrato molecular
• Estrategias de pruebas reflejas y co-pruebas
• Secuenciación de nueva generación en aspirados
• Adecuación de la muestra para ensayos moleculares

Mechanisms

Las muestras citológicas, particularmente las preparaciones en base líquida, retienen células y fluido residual de los cuales se pueden extraer ADN y ARN; estos ácidos nucleicos son luego analizados mediante ensayos de amplificación, hibridación o secuenciación. En aplicaciones cervicales, los ensayos detectan el ADN o ARN de tipos de VPH de alto riesgo cuya infección persistente subyace a la carcinogénesis cervical, y dichas pruebas pueden combinarse o sustituir a la citología morfológica. En la citología de tumores sólidos, el material de aspirado con aguja fina puede proporcionar suficiente ácido nucleico para la secuenciación dirigida o de nueva generación con el fin de identificar alteraciones diagnóstica o terapéuticamente relevantes.

Clinical relevance

Las pruebas moleculares convierten una muestra citológica en una fuente de información genómica y viral utilizada en la clasificación, estratificación de riesgos y notificación de biomarcadores; la detección de VPH, en particular, ha reconfigurado los paradigmas del cribado cervical. Esta entrada describe cómo se realizan dichas pruebas; los algoritmos de cribado específicos y las decisiones basadas en biomarcadores son asuntos clínicos y no constituyen un consejo individualizado aquí.

Epidemiology

La infección persistente por tipos de VPH de alto riesgo es la causa necesaria de casi todos los cánceres de cuello uterino, lo que convierte la detección de ácidos nucleicos virales en muestras de citología cervical en un objetivo de cribado biológicamente fundamentado (Schiffman et al., 2007).

Evidence & guidelines

La evidencia de cribado aleatorizado, incluyendo los resultados finales del estudio ATHENA, ha evaluado las pruebas primarias de VPH como estrategia de cribado cervical de primera línea en comparación con los enfoques basados en citología (Wright et al., 2015). Para tumores sólidos, los estudios han demostrado que la secuenciación de nueva generación puede realizarse en muestras citológicas de aspirado con aguja fina para obtener diagnósticos moleculares (Qiu et al., 2015).

History

El descubrimiento de que el VPH de alto riesgo es la causa necesaria del cáncer de cuello uterino transformó la citología cervical de un cribado puramente morfológico en un escenario para la co-prueba molecular y, posteriormente, el cribado primario de VPH. Paralelamente, el crecimiento de la terapia dirigida contra el cáncer impulsó la adaptación de ensayos moleculares y de secuenciación a las pequeñas muestras producidas por la aspiración con aguja fina.

Debates

¿Debería la prueba primaria de VPH reemplazar el cribado cervical basado en citología?

Ensayos como ATHENA respaldan la prueba primaria de VPH como cribado de primera línea, pero la combinación óptima de pruebas de VPH, citología y triaje sigue siendo objeto de debate y varía entre los programas de cribado.

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

¿Pueden realizarse pruebas moleculares en la misma muestra utilizada para citología?

A menudo sí; las preparaciones de citología en base líquida retienen células y fluido residual de los cuales se pueden extraer ácidos nucleicos, permitiendo la detección de VPH u otros ensayos moleculares en la misma muestra.

¿Por qué se utiliza la prueba de VPH en el cribado del cáncer de cuello uterino?

La infección persistente por tipos de VPH de alto riesgo es la causa necesaria de casi todos los cánceres de cuello uterino, por lo que la detección de ácidos nucleicos virales identifica a la población en riesgo y complementa o, en algunos programas, precede a la citología morfológica.