Hibridación in situ con fluorescencia (FISH) en citología

La hibridación in situ con fluorescencia (FISH) utiliza sondas de ADN marcadas con fluorescencia que se unen a secuencias complementarias en los núcleos celulares, haciendo visibles regiones cromosómicas o genes específicos bajo un microscopio de fluorescencia. Aplicada a muestras citológicas, puede detectar aneuploidías, amplificaciones génicas, deleciones y reordenamientos directamente en células intactas, añadiendo una dimensión citogenética a la evaluación morfológica.

Definition

FISH es una técnica citogenética auxiliar en la que sondas de ácidos nucleicos marcadas con fluorescencia se hibridan con dianas de ADN específicas dentro de las células en una preparación citológica, permitiendo la visualización de cambios en el número de copias cromosómicas y reordenamientos estructurales.

Scope

Esta entrada abarca el principio de la hibridación de sondas en preparaciones citológicas, los tipos de anomalías genómicas que FISH puede resolver y sus aplicaciones citológicas establecidas, como los ensayos multitarget en muestras urinarias y bronquiales. Es una referencia metodológica y no proporciona protocolos de prueba o interpretación.

Core questions

• ¿Qué anomalías cromosómicas o a nivel genético puede resolver FISH en una muestra citológica determinada?
• ¿Cómo determinan el diseño de la sonda y los criterios de enumeración de señales un resultado positivo?
• ¿Cómo complementa FISH la morfología citológica en muestras equívocas o atípicas?

Key concepts

• Hibridación de sondas específica de secuencia
• Sondas centroméricas, específicas de locus y de ruptura (break-apart)
• Detección de aneuploidía y número de copias
• Paneles de sondas multitarget (p. ej., UroVysion)
• Enumeración de señales y umbrales de puntuación
• Aplicación a células intactas en portaobjetos

Mechanisms

El ADN de la sonda desnaturalizado de cadena simple, transportado por un fluoróforo, se une a su secuencia diana complementaria dentro del ADN nuclear desnaturalizado de las células fijadas en un portaobjetos; después de lavar la sonda no unida, las señales unidas se cuentan bajo microscopía de fluorescencia. Las sondas centroméricas informan sobre el número de copias cromosómicas, las sondas específicas de locus detectan la amplificación o deleción de una región, y las sondas de ruptura (break-apart) de doble color revelan reordenamientos mediante la separación de señales emparejadas. Los paneles multitarget combinan varias sondas para que los patrones de aneuploidía característicos de la malignidad puedan reconocerse en células que morfológicamente parecen ambiguas.

Clinical relevance

FISH añade información citogenética objetiva a la citología, por ejemplo, ayudando a evaluar muestras uroteliales atípicas o a valorar la citología pulmonar, y se utiliza como un complemento en lugar de un reemplazo para la revisión morfológica. Esta entrada describe cómo el método genera información; la selección e interpretación específicas del ensayo son decisiones de laboratorio y clínicas y no constituyen un consejo individualizado.

Evidence & guidelines

Estudios de muestras pareadas del ensayo multitarget UroVysion en orina evacuada han comparado su rendimiento con la citología convencional para la detección de carcinoma urotelial, informando fortalezas y limitaciones complementarias (Lavery et al., 2017; Dimashkieh et al., 2013). De manera similar, FISH multitarget se ha evaluado en muestras de citología bronquial para la detección de cáncer de pulmón (Zhai et al., 2015).

History

La hibridación in situ se desarrolló por primera vez para preparaciones de tejidos y cromosomas; la sustitución de marcadores fluorescentes por radiactivos hizo que los ensayos multicolor y multiproba fueran prácticos y permitió que la técnica se aplicara directamente a portaobjetos citológicos. Los paneles urinarios multitarget se convirtieron en una de las aplicaciones citológicas más estudiadas.

Debates

¿Cómo deben combinarse FISH y la citología convencional en muestras urinarias atípicas?

Los estudios muestran que FISH y la citología tienen sensibilidad y especificidad complementarias, lo que plantea la cuestión de si FISH se utiliza mejor como una prueba refleja, un complemento a la morfología o una herramienta de triaje, sin que se haya adoptado universalmente un único enfoque.

Seminal works

• dimashkieh-2013
• lavery-2017

Frequently asked questions

¿Qué tipos de anomalías puede detectar FISH en muestras citológicas?

FISH puede revelar aneuploidías cromosómicas, amplificaciones y deleciones génicas, y reordenamientos estructurales mediante el recuento de señales de sondas fluorescentes en núcleos celulares individuales en el portaobjetos.

¿FISH reemplaza la citología convencional?

No; se utiliza como un complemento. FISH y la citología morfológica tienen fortalezas complementarias, y FISH añade información citogenética en lugar de sustituir la evaluación visual de las células.