真菌培养与分离

真菌培养是指在人工培养基上培养患者标本中的真菌，以便回收、检查、鉴定和测试活的微生物。尽管周转时间比直接检测方法慢，但培养仍然是参考标准，因为它能产生活的分离物，用于明确的物种鉴定和抗真菌药敏试验。

Definition

真菌培养和分离是一套实验室技术，通过在有利于真菌生长的条件下接种选择性或富集培养基，从临床材料中回收活的真菌，从而获得纯分离物以进行进一步的鉴定和测试。

Scope

本主题涵盖了从临床标本中回收真菌的原理：选择性培养基和富集培养基、孵育条件、培养中酵母和霉菌的区别，以及纯分离物如何支持通过形态学、质谱或测序进行鉴定。它将培养视为一种实验室方法，不提供标本采集方案或治疗指导。

Core questions

• 哪种培养基和孵育条件最能从特定标本中回收可疑真菌？
• 如何区分临床上重要的分离物和环境污染？
• 何时需要通过测序或质谱确认基于培养的鉴定？
• 侵袭性真菌病中培养敏感性的局限性是什么？

Key concepts

• 选择性培养基和富集培养基（例如，沙氏琼脂）
• 酵母与霉菌生长
• 孵育温度和时间
• 纯分离物和传代培养
• 污染与真实病原体
• 培养作为药敏试验的底物
• 分离物的多相鉴定

Mechanisms

标本接种到配制用于支持真菌生长同时抑制竞争细菌的培养基上，经典的是沙氏葡萄糖琼脂，有时添加抗菌剂或选择性添加剂。培养皿和斜面进行孵育，通常需要较长时间，因为许多真菌生长缓慢，并且在选择的温度下进行，以揭示二态性或耐热性。然后评估生长情况：酵母形成糊状菌落，而霉菌产生丝状、通常有色素的菌落，其宏观和微观形态指导鉴定。培养提供的纯分离物是物种通过形态学、MALDI-TOF质谱或DNA测序确认的基础，也是测量抗真菌药敏性的基础。由于活微生物可能稀少，培养在深部或已治疗的感染中可能不敏感，这就是为什么它与直接和分子方法一起解释的原因。

Clinical relevance

培养是确认和命名真菌病原体的主要基础，从通常无菌部位获得的阳性培养在侵袭性真菌病的共识定义中具有特殊的诊断意义。本条目描述了该方法及其解释价值；它是关于如何获得分离物的参考材料，而不是标本处理或患者管理的指南。

Evidence & guidelines

英国医学真菌学会和EORTC/MSGERC共识定义的最佳实践建议描述了培养在诊断方法中的作用，包括当真菌从无菌部位回收时的权重及其在某些侵袭性感染中已知的不敏感性。参考图谱编目了用于鉴定分离物的菌落和微观形态。

History

在特定培养基上培养是医学真菌学的基本工具，20世纪初引入的沙氏葡萄糖琼脂成为回收和鉴定真菌的标准底物。在本世纪的大部分时间里，鉴定依赖于从培养物中读取的菌落和微观形态，后来质谱和测序才为培养分离物的鉴定增加了精确性。

Seminal works

• schelenz-2015
• dehoog-2020

Frequently asked questions

为什么真菌培养通常需要很长时间？

许多医学上重要的霉菌和一些酵母生长缓慢，因此培养可能需要数天到数周才能出现可见生长和可靠鉴定，这是更快直接和分子方法与培养同时使用的原因之一。

阳性真菌培养是否总是意味着感染？

不一定。真菌在环境和体表很常见，因此阳性培养必须结合具体情况进行解释；从通常无菌部位回收比从受污染或定植标本中回收更有意义。