真菌的显微镜检查和染色方法

直接显微镜检查和染色使实验室能够在不等待培养结果的情况下，在样本中观察到真菌成分。简单的湿法制备、荧光增白剂和组织染色可以显示菌丝、酵母和孢子，从而快速提供真菌存在的证据，并在组织中提供侵袭的证据。

Definition

真菌的显微镜检查和染色方法是利用澄清剂、荧光细胞壁结合剂或组织化学染色剂，在临床样本或组织切片中显示真菌结构的技术，以便在光学或荧光显微镜下观察菌丝、酵母和孢子。

Scope

本主题涵盖了真菌的可视化方法：用于清除样本的氢氧化钾湿法制片、结合真菌细胞壁的荧光染料（如钙荧光白），以及用于组织切片的组织病理学染色。它还涵盖了形态学可以和不能告诉观察者关于真菌身份的信息。这是一份描述性的方法参考，而非诊断或治疗方案。

Core questions

• 该样本中是否存在真菌成分，它们呈现何种形态？
• 哪种染色方法最能显示湿法制片与组织切片中的真菌？
• 仅凭形态学能在多大程度上缩小真菌的身份范围？
• 显微镜检查是否显示组织侵袭而非表面定植？

Key concepts

• 氢氧化钾 (KOH) 湿法制片
• 钙荧光白荧光染色
• 过碘酸-希夫 (PAS) 染色
• Grocott-Gomori 六胺银 (GMS) 染色
• 菌丝、酵母和假菌丝
• 组织侵袭与定植
• 形态学鉴定的局限性

Mechanisms

在KOH制剂中，氢氧化钾溶解角蛋白和其他宿主物质，使折射率高的真菌壁在显微镜下可见。钙荧光白等荧光增白剂与真菌细胞壁中的几丁质和纤维素结合，并在紫外光下发出荧光，使菌丝和酵母在黑暗背景下清晰可见。在组织中，特殊染色利用富含多糖的细胞壁：过碘酸-希夫染色将真菌壁染成洋红色，而Grocott-Gomori六胺银染色则沉积银使其变黑，从而可以在切片中观察到真菌，并且关键的是，可以判断其是否侵袭组织。形态学，即菌丝的分支模式、酵母或假菌丝的存在以及分隔，可以缩小鉴别范围，但很少能特异性地识别到物种，因此显微镜检查通常与培养、抗原或分子方法结合使用以进行明确鉴定。

Clinical relevance

显微镜检查提供了真菌存在的最快证据之一，并且在组织中，它提供了真菌侵袭的证据，这对于识别侵袭性真菌病至关重要。本条目解释了这些方法及其解释限制，作为参考资料；它不指导样本制备或患者管理。

Evidence & guidelines

真菌组织病理学综述记录了用于显示组织中真菌的染色方法以及通过外观识别生物体的形态学线索和局限性。严重真菌病诊断的最佳实践建议将直接显微镜检查和荧光染色定位为与培养和分子检测结合使用的快速一线方法。

History

直接显微镜检查是最古老的真菌学方法之一，氢氧化钾湿法制片长期以来一直用于显示皮肤癣菌和其他真菌。Grocott-Gomori六胺银和过碘酸-希夫等组织化学染色方法在20世纪成为显示组织中真菌的标准方法，后来荧光增白剂通过使细胞壁在紫外光下发光而提高了灵敏度。

Seminal works

• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

显微镜检查能否识别确切的真菌物种？

通常不能。显微镜检查可以显示真菌的存在并提示大致的类别，如酵母或霉菌，但精确的物种鉴定通常需要培养、质谱分析或DNA测序。

为什么钙荧光白对观察真菌很有用？

钙荧光白与真菌细胞壁的成分结合，并在紫外光下发出荧光，使即使是稀疏的菌丝和酵母也能明亮地显现出来，与未染色的湿法制片相比，这提高了检测率。