प्रतिरक्षा मूल्यांकन में लिम्फोसाइट गणना और फ्लो साइटोमेट्री

लिम्फोसाइट्स अनुकूली प्रतिरक्षा का कार्य करते हैं, और उनकी संख्या तथा उपसमूह संरचना प्रतिरक्षा स्थिति के मूल्यांकन के लिए केंद्रीय हैं। फ्लो साइटोमेट्री लिम्फोसाइट्स की गणना करने और उनके द्वारा व्यक्त किए गए मार्करों द्वारा उनके उपसमूहों की पहचान करने के लिए प्रमुख प्रयोगशाला विधि है, जिससे यह प्रतिरक्षा मूल्यांकन और लिम्फोइड रोग के लक्षण वर्णन का मुख्य आधार बन जाती है।

Definition

लिम्फोसाइट गणना लिम्फोसाइट्स और उनके उपसमूहों का मात्रात्मक मापन है; फ्लो साइटोमेट्री वह तकनीक है जो उनके इम्यूनोफेनोटाइप द्वारा आबादी की पहचान और गणना करने के लिए निलंबन में कोशिकाओं के भौतिक और प्रतिदीप्ति गुणों को मापती है।

Scope

यह विषय फ्लो साइटोमेट्री द्वारा लिम्फोसाइट गणना और इम्यूनोफेनोटाइपिंग को कवर करता है: कुल लिम्फोसाइट्स और उनके उपसमूहों (जैसे टी, बी, और प्राकृतिक किलर कोशिकाएं) का मापन, प्रतिरक्षा स्थिति के सूचकांक के रूप में CD4 टी-कोशिका गणना का उपयोग, और प्रतिक्रियाशील तथा नियोप्लास्टिक लिम्फोइड आबादी के लक्षण वर्णन में मानकीकृत एंटीबॉडी पैनलों की भूमिका। यह विधि और इसके अनुप्रयोगों का एक संदर्भ विवरण है, न कि किसी व्यक्ति के लिए नैदानिक मार्गदर्शन या व्याख्या।

Core questions

• फ्लो साइटोमेट्री लिम्फोसाइट उपसमूहों की पहचान और गणना कैसे करती है?
• CD4 टी-कोशिका गणना क्या दर्शाती है और इसे विश्वसनीय रूप से कैसे मापा जाता है?
• मानकीकृत एंटीबॉडी पैनल इम्यूनोफेनोटाइपिंग की पुनरुत्पादकता में कैसे सुधार करते हैं?
• प्रतिक्रियाशील और नियोप्लास्टिक लिम्फोइड आबादी के बीच अंतर करने के लिए फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग कैसे किया जाता है?

Key concepts

• फ्लो साइटोमेट्री सिद्धांत (प्रकाश प्रकीर्णन और प्रतिदीप्ति)
• इम्यूनोफेनोटाइपिंग और CD मार्कर
• लिम्फोसाइट उपसमूह (टी, बी, NK कोशिकाएं)
• CD4 टी-कोशिका गणना
• एकल-प्लेटफॉर्म बनाम दोहरी-प्लेटफॉर्म गणना
• गेटिंग रणनीति
• मानकीकृत एंटीबॉडी पैनल (यूरोफ्लो)
• क्लोनालिटी मूल्यांकन

Mechanisms

फ्लो साइटोमेट्री में, निलंबन में कोशिकाएं एक या एक से अधिक लेजर बीम से एकल-पंक्ति में गुजरती हैं; फॉरवर्ड और साइड लाइट स्कैटर कोशिका के आकार और जटिलता की रिपोर्ट करते हैं, जबकि सतह या इंट्रासेलुलर एंटीजन से बंधे फ्लोरोक्रोम-संयुग्मित एंटीबॉडी रिपोर्ट करते हैं कि एक कोशिका कौन से मार्कर व्यक्त करती है। मार्करों को मिलाकर और एक गेटिंग रणनीति लागू करके, CD4 और CD8 टी कोशिकाएं, बी कोशिकाएं, और प्राकृतिक किलर कोशिकाएं जैसी आबादी की पहचान की जाती है और उनकी गणना की जाती है (मैकर 2015)। गणना एक ही प्लेटफॉर्म पर (सीधे प्रति आयतन कोशिकाएं) या प्रतिशत को एक अलग कोशिका गणना के साथ मिलाकर प्राप्त की जा सकती है; CD4 गणना में सटीकता के लिए एकल-प्लेटफॉर्म दृष्टिकोण को सामान्यतः प्राथमिकता दी जाती है (व्हिटबी 2013)। मानकीकृत, मान्य एंटीबॉडी पैनल - जैसे यूरोफ्लो पैनल - इम्यूनोफेनोटाइपिंग को प्रयोगशालाओं में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाते हैं और असामान्य या क्लोनल लिम्फोइड आबादी की पहचान का समर्थन करते हैं, जो लिम्फोइड नियोप्लाज्म के वर्गीकरण में योगदान देता है (वैन डोंगें 2012; स्वर्डलो 2016)।

Clinical relevance

लिम्फोसाइट गणना प्रतिरक्षा स्थिति के मूल्यांकन का आधार है - उदाहरण के लिए, CD4 टी-कोशिका गणना एचआईवी संक्रमण के संदर्भ में एक लंबे समय से स्थापित सूचकांक है - और इम्यूनोफेनोटाइपिंग लिम्फोप्रोलिफेरेटिव और इम्यूनोडेफिशिएंसी विकारों के लक्षण वर्णन के लिए अभिन्न है। यह प्रविष्टि बताती है कि विधि कैसे काम करती है और यह जनसंख्या और प्रयोगशाला स्तर पर क्या मापती है; यह व्यक्तिगत निदान, स्टेजिंग या उपचार का आधार नहीं है।

Evidence & guidelines

पुनरुत्पादित इम्यूनोफेनोटाइपिंग मानकीकृत एंटीबॉडी पैनल (वैन डोंगें 2012) और प्रतिरक्षा निगरानी के लिए फ्लो और मास साइटोमेट्री पर आम सहमति मार्गदर्शन (मैकर 2015) द्वारा आधारित है। मेथोडोलॉजिक अध्ययन CD4 गणना की माप सीमाओं और एकल-प्लेटफॉर्म गणना के लाभ को परिभाषित करते हैं (व्हिटबी 2013), और इम्यूनोफेनोटाइपिक श्रेणियां लिम्फोइड नियोप्लाज्म के विश्व स्वास्थ्य संगठन वर्गीकरण में योगदान करती हैं (स्वर्डलो 2016)।

Debates

एकल-प्लेटफॉर्म बनाम दोहरी-प्लेटफॉर्म CD4 गणना

एकल-प्लेटफॉर्म विधियां सीधे पूर्ण गणना प्राप्त करती हैं और सामान्यतः दोहरी-प्लेटफॉर्म दृष्टिकोणों की तुलना में कम त्रुटि दिखाती हैं जो एक प्रतिशत को एक अलग कोशिका गणना के साथ जोड़ते हैं, जिसने CD4 गणना के लिए अनुशंसित अभ्यास को प्रभावित किया है।

Seminal works

• vandongen-2012
• maecker-2015
• swerdlow-2016

Frequently asked questions

CD4 गणना क्या मापती है?

CD4 गणना CD4 मार्कर व्यक्त करने वाले टी लिम्फोसाइट्स की संख्या को मापती है, सामान्यतः प्रति माइक्रोलीटर रक्त; इसका उपयोग प्रतिरक्षा स्थिति के सूचकांक के रूप में किया जाता है, विशेष रूप से एचआईवी संक्रमण के संदर्भ में।

फ्लो साइटोमेट्री लिम्फोसाइट प्रकारों को कैसे अलग करती है?

फ्लोरोसेंट रंगों से टैग किए गए एंटीबॉडी विशिष्ट सतह मार्करों से बंधते हैं, और साइटोमीटर पता लगाता है कि प्रत्येक कोशिका कौन से मार्कर वहन करती है, जिससे टी कोशिकाओं, बी कोशिकाओं और प्राकृतिक किलर कोशिकाओं जैसी आबादी को अलग किया जा सकता है और उनकी गणना की जा सकती है।