इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री और प्रोटीन पहचान के तरीके

इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री (IHC) ऊतक खंडों में प्रोटीन का स्थानीयकरण और मापन करती है, जिसमें एक दृश्य लेबल से जुड़े एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है, यह दर्शाता है कि एक जीन उत्पाद कहाँ व्यक्त होता है और, अर्ध-मात्रात्मक रूप से, कितना। प्रतिलेख मात्रा निर्धारण के प्रोटीन-स्तर के समकक्ष के रूप में, यह नैदानिक और आणविक विकृति विज्ञान में एक नियमित उपकरण है।

Definition

इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री एक ऊतक-आधारित विधि है जो विशिष्ट प्रोटीन को यथास्थान (in situ) पहचानने के लिए लेबल किए गए एंटीबॉडी का उपयोग करती है, उनकी कोशिकीय और उपकोशिकीय स्थिति को दृश्यमान बनाती है और प्रोटीन अभिव्यक्ति का एक अर्ध-मात्रात्मक अनुमान प्रदान करती है।

Scope

यह विषय एंटीबॉडी-आधारित पहचान सिद्धांत, गुणात्मक स्थानीयकरण और धुंधलापन की तीव्रता और सीमा के अर्ध-मात्रात्मक स्कोरिंग के बीच अंतर, मानकीकरण और नियंत्रणों के महत्व, और हार्मोन-रिसेप्टर और HER2 मूल्यांकन जैसे प्रसिद्ध अनुप्रयोगों को विधि के दृष्टांत के रूप में शामिल करता है। यह IHC को एक मापन पद्धति के रूप में मानता है और नैदानिक सीमाएँ या उपचार दिशा प्रदान नहीं करता है।

Core questions

• लेबल किए गए एंटीबॉडी एक ऊतक खंड के भीतर एक प्रोटीन का स्थानीयकरण कैसे करते हैं?
• धुंधलापन को अर्ध-मात्रात्मक स्कोर में कैसे परिवर्तित किया जाता है?
• प्रजनन योग्य IHC के लिए नियंत्रण और मानकीकरण क्यों आवश्यक हैं?
• प्रोटीन-स्तर का पता लगाना प्रतिलेख मात्रा निर्धारण का पूरक कैसे है?

Key concepts

• एंटीबॉडी-एंटीजन बंधन
• एंटीजन पुनर्प्राप्ति
• क्रोमोजेनिक और प्रतिदीप्त पहचान
• अर्ध-मात्रात्मक स्कोरिंग (तीव्रता और सीमा)
• सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण
• पूर्व-विश्लेषणात्मक निर्धारण प्रभाव

Mechanisms

एक प्राथमिक एंटीबॉडी एक निश्चित ऊतक खंड में अपने लक्ष्य एंटीजन को बांधती है; पहचान को द्वितीयक एंटीबॉडी और एंजाइम- या फ्लोरोफोर-लिंक्ड सिस्टम के माध्यम से बढ़ाया जाता है जो एंटीजन के स्थान पर एक रंगीन या प्रतिदीप्त जमाव उत्पन्न करते हैं। निर्धारण और एंटीजन-पुनर्प्राप्ति के चरण प्रभावित करते हैं कि एपिटोप्स पता लगाने योग्य रहते हैं या नहीं, इसलिए पूर्व-विश्लेषणात्मक हैंडलिंग परिणाम को दृढ़ता से प्रभावित करती है। अभिव्यक्ति को धुंधलापन की तीव्रता और सकारात्मक कोशिकाओं के अनुपात का आकलन करके अर्ध-मात्रात्मक रूप से पढ़ा जाता है, जिसे अक्सर एक स्कोर में संयोजित किया जाता है; क्योंकि यह रीडिंग पर्यवेक्षक- और प्रोटोकॉल-निर्भर होती है, प्रजनन क्षमता के लिए मान्य नियंत्रण और मानकीकृत प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है। व्यावसायिक दिशानिर्देश बताते हैं कि रिसेप्टर परीक्षण के लिए स्कोरिंग और पूर्व-विश्लेषणात्मक चर को कैसे मानकीकृत किया जाता है (Hammond et al., 2010; Wolff et al., 2013)।

Clinical relevance

IHC ऊतक निदान और प्रोटीन बायोमार्कर की रिपोर्टिंग के लिए केंद्रीय है, और इसकी अर्ध-मात्रात्मक प्रकृति को समझना विकृति विज्ञान रिपोर्टों की व्याख्या का हिस्सा है। यह प्रविष्टि विधि और इसके मानकीकरण का वर्णन करती है; उद्धृत दिशानिर्देशों को कार्यप्रणाली और रिपोर्टिंग को स्पष्ट करने के लिए संदर्भित किया गया है, न कि व्यक्तिगत रोगियों के लिए नैदानिक कट-ऑफ या उपचार निर्णय प्रदान करने के लिए।

Evidence & guidelines

अर्ध-मात्रात्मक IHC का मानकीकरण एस्ट्रोजन और प्रोजेस्टेरोन रिसेप्टर परीक्षण (Hammond et al., 2010) और स्तन कैंसर में HER2 परीक्षण (Wolff et al., 2013) के लिए संयुक्त ASCO/CAP दिशानिर्देशों द्वारा उदाहरणित किया गया है, जो पूर्व-विश्लेषणात्मक हैंडलिंग, स्कोरिंग और नियंत्रण आवश्यकताओं को परिभाषित करते हैं। इन्हें यहाँ कार्यप्रणाली संबंधी संदर्भों के रूप में उद्धृत किया गया है।

History

एंटीबॉडी-आधारित ऊतक धुंधलापन बीसवीं सदी के मध्य में इम्यूनोफ्लोरेसेंस से विकसित हुआ, जिसके बाद एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोपरॉक्सिडेज़ विधियाँ आईं जिन्होंने स्थायी, प्रकाश-माइक्रोस्कोपी-दृश्यमान धुंधलापन की अनुमति दी। जैसे-जैसे प्रोटीन बायोमार्कर विकृति विज्ञान के लिए केंद्रीय हो गए, निर्धारण, एंटीजन पुनर्प्राप्ति और स्कोरिंग के मानकीकरण पर ध्यान केंद्रित किया गया, जिसे रिसेप्टर परीक्षण के लिए आम सहमति दिशानिर्देशों में औपचारिक रूप दिया गया (Hammond et al., 2010; Wolff et al., 2013)।

Debates

अर्ध-मात्रात्मक IHC स्कोरिंग कितनी प्रजनन योग्य है?

क्योंकि धुंधलापन की तीव्रता और सीमा का आकलन नेत्रहीन किया जाता है और यह निर्धारण और प्रोटोकॉल पर निर्भर करता है, परिणाम पर्यवेक्षकों और प्रयोगशालाओं के बीच भिन्न हो सकते हैं; प्रजनन क्षमता में सुधार के लिए मानकीकृत पूर्व-विश्लेषणात्मक, मान्य नियंत्रण और परिभाषित स्कोरिंग मानदंड का उपयोग किया जाता है।

Key figures

• M. Elizabeth Hammond
• Antonio Wolff
• D. Craig Allred

Seminal works

• hammond-2010
• wolff-2013

Frequently asked questions

क्या इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री मात्रात्मक है?

IHC को अर्ध-मात्रात्मक के रूप में सबसे अच्छी तरह वर्णित किया गया है: यह एक सटीक एकाग्रता उत्पन्न करने के बजाय धुंधलापन की तीव्रता और सकारात्मक कोशिकाओं के अनुपात का आकलन करके प्रोटीन अभिव्यक्ति का अनुमान लगाता है, यही कारण है कि मानकीकृत स्कोरिंग और नियंत्रण महत्वपूर्ण हैं।

ऊतक निर्धारण IHC परिणामों को क्यों प्रभावित करता है?

निर्धारण और बाद का एंटीजन-पुनर्प्राप्ति चरण उन एपिटोप्स को मास्क या उजागर कर सकता है जिनसे एंटीबॉडी बंधते हैं, इसलिए पूर्व-विश्लेषणात्मक हैंडलिंग में भिन्नता धुंधलापन को बदल सकती है और विश्वसनीय परिणामों के लिए इसे मानकीकृत किया जाना चाहिए।