साइटोलॉजी में फ्लोरेसेंस इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (FISH)

फ्लोरेसेंस इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन (FISH) फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किए गए डीएनए प्रोब का उपयोग करता है जो कोशिका नाभिक में पूरक अनुक्रमों से जुड़ते हैं, जिससे फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप के तहत विशिष्ट गुणसूत्र क्षेत्र या जीन दिखाई देते हैं। साइटोलॉजिक नमूनों पर लागू होने पर, यह अक्षुण्ण कोशिकाओं में सीधे एन्यूप्लोइडी, जीन प्रवर्धन, विलोपन और पुनर्व्यवस्था का पता लगा सकता है, जिससे रूपात्मक मूल्यांकन में एक साइटोजेनेटिक आयाम जुड़ जाता है।

Definition

FISH एक सहायक साइटोजेनेटिक तकनीक है जिसमें फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किए गए न्यूक्लिक-एसिड प्रोब एक साइटोलॉजिक तैयारी पर कोशिकाओं के भीतर विशिष्ट डीएनए लक्ष्यों के साथ संकरण करते हैं, जिससे गुणसूत्र प्रतिलिपि-संख्या परिवर्तनों और संरचनात्मक पुनर्व्यवस्थाओं का विज़ुअलाइज़ेशन संभव होता है।

Scope

यह प्रविष्टि साइटोलॉजिक तैयारी पर प्रोब हाइब्रिडाइजेशन के सिद्धांत, जीनोमिक असामान्यताओं के प्रकार जिन्हें FISH हल कर सकता है, और इसके स्थापित साइटोलॉजिक अनुप्रयोगों जैसे मूत्र और ब्रोन्कियल नमूनों में मल्टीटारगेट परख को शामिल करती है। यह एक कार्यप्रणाली संदर्भ है और परीक्षण या व्याख्या प्रोटोकॉल प्रदान नहीं करता है।

Core questions

• किसी दिए गए साइटोलॉजिक नमूने में FISH कौन सी गुणसूत्र या जीन-स्तर की असामान्यताओं को हल कर सकता है?
• प्रोब डिज़ाइन और सिग्नल-गणना मानदंड एक सकारात्मक परिणाम कैसे निर्धारित करते हैं?
• संदिग्ध या असामान्य नमूनों में FISH साइटोलॉजिक मॉर्फोलॉजी का पूरक कैसे है?

Key concepts

• अनुक्रम-विशिष्ट प्रोब हाइब्रिडाइजेशन
• सेंट्रोमेरिक, लोकस-विशिष्ट, और ब्रेक-अपार्ट प्रोब
• एन्यूप्लोइडी और प्रतिलिपि-संख्या का पता लगाना
• मल्टीटारगेट प्रोब पैनल (जैसे, यूरोविजन)
• सिग्नल गणना और स्कोरिंग थ्रेशोल्ड
• स्लाइड पर अक्षुण्ण कोशिकाओं पर अनुप्रयोग

Mechanisms

विकृत एकल-स्ट्रैंडेड प्रोब डीएनए, एक फ्लोरोफोर द्वारा ले जाया जाता है, एक स्लाइड पर स्थिर कोशिकाओं के विकृत परमाणु डीएनए के भीतर अपने पूरक लक्ष्य अनुक्रम से जुड़ता है; अनबाउंड प्रोब को धोने के बाद, बाउंड संकेतों को फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी के तहत गिना जाता है। सेंट्रोमेरिक प्रोब गुणसूत्र प्रतिलिपि संख्या की रिपोर्ट करते हैं, लोकस-विशिष्ट प्रोब एक क्षेत्र के प्रवर्धन या विलोपन का पता लगाते हैं, और दोहरे-रंग के ब्रेक-अपार्ट प्रोब युग्मित संकेतों के पृथक्करण द्वारा पुनर्व्यवस्थाओं को प्रकट करते हैं। मल्टीटारगेट पैनल कई प्रोब को जोड़ते हैं ताकि दुर्दमता के विशिष्ट एन्यूप्लोइडी पैटर्न को उन कोशिकाओं में पहचाना जा सके जो रूपात्मक रूप से अस्पष्ट दिखती हैं।

Clinical relevance

FISH साइटोलॉजी में वस्तुनिष्ठ साइटोजेनेटिक जानकारी जोड़ता है, उदाहरण के लिए असामान्य यूरोथेलियल नमूनों का मूल्यांकन करने या फुफ्फुसीय साइटोलॉजी का आकलन करने में मदद करता है, और इसे रूपात्मक समीक्षा के प्रतिस्थापन के बजाय एक सहायक के रूप में उपयोग किया जाता है। यह प्रविष्टि बताती है कि विधि जानकारी कैसे उत्पन्न करती है; विशिष्ट परख चयन और व्याख्या प्रयोगशाला और नैदानिक निर्णय हैं और व्यक्तिगत सलाह नहीं हैं।

Evidence & guidelines

मूत्र में मल्टीटारगेट यूरोविजन परख के युग्मित-नमूना अध्ययनों ने यूरोथेलियल कार्सिनोमा का पता लगाने के लिए पारंपरिक साइटोलॉजी के साथ इसके प्रदर्शन की तुलना की है, जिसमें पूरक शक्तियों और सीमाओं की रिपोर्ट की गई है (Lavery et al., 2017; Dimashkieh et al., 2013)। मल्टीटारगेट FISH का मूल्यांकन फेफड़ों के कैंसर का पता लगाने के लिए ब्रोन्कियल साइटोलॉजी नमूनों पर भी किया गया है (Zhai et al., 2015)।

History

इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन को पहली बार ऊतक और गुणसूत्र तैयारियों के लिए विकसित किया गया था; रेडियोधर्मी लेबल के लिए फ्लोरोसेंट लेबल के प्रतिस्थापन ने बहु-रंग, बहु-प्रोब परख को व्यावहारिक बनाया और तकनीक को सीधे साइटोलॉजिक स्लाइड पर लागू करने की अनुमति दी। मल्टीटारगेट मूत्र पैनल सबसे व्यापक रूप से अध्ययन किए गए साइटोलॉजिक अनुप्रयोगों में से एक बन गए।

Debates

असामान्य मूत्र नमूनों में FISH और पारंपरिक साइटोलॉजी को कैसे जोड़ा जाना चाहिए?

अध्ययन से पता चलता है कि FISH और साइटोलॉजी में पूरक संवेदनशीलता और विशिष्टता होती है, जिससे यह सवाल उठता है कि क्या FISH का उपयोग रिफ्लेक्स टेस्ट, मॉर्फोलॉजी के सहायक, या ट्राइएज टूल के रूप में सबसे अच्छा किया जाता है, जिसमें कोई एक दृष्टिकोण सार्वभौमिक रूप से नहीं अपनाया गया है।

Seminal works

• dimashkieh-2013
• lavery-2017

Frequently asked questions

FISH साइटोलॉजिक नमूनों में किस प्रकार की असामान्यताओं का पता लगा सकता है?

FISH स्लाइड पर व्यक्तिगत कोशिका नाभिक में फ्लोरोसेंट प्रोब संकेतों की गणना करके गुणसूत्र एन्यूप्लोइडी, जीन प्रवर्धन और विलोपन, और संरचनात्मक पुनर्व्यवस्थाओं को प्रकट कर सकता है।

क्या FISH पारंपरिक साइटोलॉजी की जगह लेता है?

नहीं; इसका उपयोग एक सहायक के रूप में किया जाता है। FISH और रूपात्मक साइटोलॉजी में पूरक शक्तियां होती हैं, और FISH कोशिकाओं के दृश्य मूल्यांकन के स्थान पर साइटोजेनेटिक जानकारी जोड़ता है।