فیکساسیون و رنگآمیزی نمونه
فیکساسیون و رنگآمیزی دو مرحله شیمیایی هستند که یک نمونه سیتولوژیک رسوبیافته را به یک لام قابل تفسیر تبدیل میکنند. فیکساسیون سلولها را تثبیت کرده و ساختار داخلی آنها را حفظ میکند؛ سپس رنگآمیزی، رنگها و کنتراست لازم را فراهم میآورد که به سیتوپاتولوژیست امکان میدهد هسته را از سیتوپلاسم تشخیص داده و جزئیات کروماتین را بخواند. جفت کردن روش فیکساسیون با رنگ، یک انتخاب آگاهانه است که تعیین میکند کدام ویژگیهای سلولی برجسته شوند.
Definition
فیکساسیون و رنگآمیزی نمونه، مراحل آمادهسازی هستند که مورفولوژی سلولی را حفظ میکنند (فیکساسیون) و رنگ انتخابی به اجزای سلولی میدهند (رنگآمیزی) تا یک لام سیتولوژیک بتواند زیر میکروسکوپ خوانده شود.
Scope
این مدخل توضیح میدهد که چرا و چگونه نمونههای سیتولوژیک فیکس میشوند (فیکساسیون مرطوب در مقابل خشک کردن عمدی در هوا)، اصول رنگآمیزیهای اصلی سیتولوژیک، و اینکه چگونه ترکیب فیکساسیون-رنگ با سؤال تشخیصی مطابقت داده میشود. این یک مرجع در سطح روششناسی است و هیچ دستورالعمل خاص بیمار را ارائه نمیدهد.
Key concepts
- فیکساسیون الکلی منعقدکننده و فیکساسیون مرطوب
- خشک کردن عمدی در هوا به عنوان یک حالت آمادهسازی
- رنگآمیزی هستهای در مقابل سیتوپلاسمی
- رنگآمیزی پاپانیکولائو (شفاف، پلیکروماتیک)
- رنگآمیزیهای رومانوفسکی برای اسمیرهای خشکشده در هوا
- آرتیفکت خشک شدن و تأثیر آن بر جزئیات هستهای
- پوشاندن با لام، شفافسازی و ماندگاری لام
Mechanisms
فیکساسیون اتولیز را متوقف کرده و پروتئینها و اسیدهای نوکلئیک سلولی را در جای خود تثبیت میکند. در سیتولوژی، فیکساتیو غالب اتانول یا اسپری مبتنی بر الکل است که در حالی که اسمیر هنوز مرطوب است (فیکساسیون مرطوب) اعمال میشود، که کروماتین هستهای ظریف مورد نیاز برای رنگآمیزی پاپانیکولائو را حفظ میکند. به عنوان جایگزین، به اسمیر اجازه داده میشود تا در هوا خشک شود، حالتی که سلولها را مسطح و بزرگ میکند و آمادهسازی لازم برای رنگآمیزیهای رومانوفسکی است. سپس رنگآمیزی از تمایل رنگهای باردار به اجزای سلولی بهره میبرد: رنگهای بازی (کاتیونی) به کروماتین هستهای اسیدی متصل میشوند، در حالی که رنگهای اسیدی (آنیونی) پروتئینهای سیتوپلاسمی را رنگ میکنند. رنگ پاپانیکولائو یک هماتوکسیلین هستهای را با چندین رنگ متقابل ترکیب میکند تا سلولهای شفاف و پلیکروماتیک ایجاد کند؛ رنگهای رومانوفسکی رنگهای آزور و ائوزین را ترکیب میکنند که تعامل آنها کروماتین بنفش مشخصه و رنگهای متاکروماتیک را تولید میکند (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).
Clinical relevance
از آنجا که فیکساسیون و رنگآمیزی قابلیت مشاهده ویژگیهایی را که برای طبقهبندی سلولها استفاده میشوند، تعیین میکنند، از تشخیص و گزارشدهی سیتولوژیک جداییناپذیر هستند. این مدخل روشها و منطق آنها را به عنوان پیشزمینهای برای درک عملکرد آزمایشگاهی توصیف میکند؛ این مبنایی برای تصمیمات بالینی فردی نیست.
Evidence & guidelines
ادبیات روششناختی نقشهای مکمل دو خانواده بزرگ رنگآمیزی – رنگآمیزی پاپانیکولائو فیکسشده با الکل برای جزئیات هستهای و کروماتین و رنگآمیزیهای رومانوفسکی خشکشده در هوا برای ویژگیهای سیتوپلاسمی و پسزمینه – را تثبیت میکند و کار استانداردسازی ویتکیند یک ترکیب آزور B-ائوزین Y را به عنوان یک رنگآمیزی مرجع رومانوفسکی-گیمسا تعریف کرد (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). متون مرجع تأکید میکنند که زمانبندی و کیفیت فیکساسیون، عوامل اصلی قابل کنترل تعیینکننده نتیجه رنگآمیزی و آرتیفکتهایی مانند تغییر شکل هستهای ناشی از خشک شدن هستند (Koss & Melamed 2006).
History
رنگآمیزی سیتولوژیک از هیستوشیمی قرن نوزدهم و رنگآمیزیهای هماتولوژی رومانوفسکی و گیمسا نشأت گرفت، سپس در دهه ۱۹۴۰ توسط رنگ پلیکروماتیک و شفاف پاپانیکولائو برای اسمیرهای فیکسشده مرطوب برای سیتولوژی اکسفولیاتیو متحول شد. کارهای بعدی قرن بیستم، از جمله مطالعات استانداردسازی رنگ ویتکیند، به دنبال این بود که رنگآمیزی رومانوفسکی را در آزمایشگاههای مختلف قابل تکرار کند (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).
Key figures
- George Papanicolaou
- Dietrich Wittekind
Related topics
Seminal works
- papanicolaou-1942
- wittekind-1982
- koss-melamed-2006
Frequently asked questions
- چرا برخی از اسمیرهای سیتولوژی باید در حالی که هنوز مرطوب هستند فیکس شوند؟
- فیکساسیون مرطوب (الکلی) جزئیات ظریف کروماتین هستهای را که رنگآمیزی پاپانیکولائو به آن وابسته است، حفظ میکند. اگر چنین اسمیر قبل از فیکساسیون خشک شود، آرتیفکت خشک شدن هستهها را تغییر شکل داده و تفسیر را مختل میکند.
- چه چیزی تعیین میکند که یک نمونه سیتولوژی چه رنگی دریافت کند؟
- این امر توسط وضعیت فیکساسیون و سؤال تشخیصی تعیین میشود: اسمیرهای فیکسشده مرطوب برای جزئیات هستهای رنگآمیزی پاپانیکولائو را میگیرند، در حالی که اسمیرهای عمداً خشکشده در هوا، رنگآمیزی رومانوفسکی را میگیرند که ویژگیهای سیتوپلاسمی و پسزمینه را برجسته میکند.