آزمایش‌های مستقیم و غیرمستقیم آنتی‌گلوبولین (کومبس)

آزمایش آنتی‌گلوبولین که معمولاً آزمایش کومبس نامیده می‌شود، از معرف آنتی‌گلوبولین انسانی برای شناسایی ایمونوگلوبولین یا کمپلمان متصل به گلبول‌های قرمز استفاده می‌کند. شکل مستقیم آن، آنتی‌بادی از قبل پوشاننده گلبول‌های قرمز بیمار را در شرایط in vivo آشکار می‌کند، در حالی که شکل غیرمستقیم آن، آنتی‌بادی موجود در پلاسما را که به سلول‌های معرف در شرایط in vitro متصل می‌شود، شناسایی می‌کند؛ این دو با هم ابزارهای اصلی ایمونوهماتولوژی هستند.

Definition

آزمایش آنتی‌گلوبولین (کومبس) ایمونوگلوبولین انسانی یا اجزای کمپلمان را روی گلبول‌های قرمز با استفاده از معرف آنتی‌گلوبولین انسانی که سلول‌های پوشیده شده را به آگلوتینه‌های قابل مشاهده متصل می‌کند، شناسایی می‌کند؛ آزمایش مستقیم گلبول‌های قرمز خود بیمار را بررسی می‌کند و آزمایش غیرمستقیم گلبول‌های قرمز معرف را پس از انکوباسیون با پلاسمای بیمار بررسی می‌کند.

Scope

این موضوع، اصل واکنش آنتی‌گلوبولین و تمایز بین آزمایش مستقیم آنتی‌گلوبولین (DAT) و آزمایش غیرمستقیم آنتی‌گلوبولین (IAT) و جایگاه هر یک در بررسی‌های سرولوژیک را توضیح می‌دهد. این روش، متد و تفسیر آزمایش را به صورت مفهومی توصیف می‌کند و پروتکلی برای تشخیص یا مدیریت بیماران خاص نیست.

Core questions

• چگونه معرف آنتی‌گلوبولین انسانی باعث آگلوتیناسیون سلول‌های پوشیده شده با آنتی‌بادی می‌شود؟
• چه چیزی آزمایش مستقیم آنتی‌گلوبولین را از آزمایش غیرمستقیم آن متمایز می‌کند؟
• نتیجه مثبت آزمایش مستقیم آنتی‌گلوبولین چه چیزی را نشان می‌دهد؟
• آزمایش غیرمستقیم آنتی‌گلوبولین چگونه در تشخیص آنتی‌بادی و کراس‌مچینگ استفاده می‌شود؟

Key concepts

• معرف آنتی‌گلوبولین انسانی (AHG)
• آنتی‌بادی‌های ناقص (IgG)
• آزمایش مستقیم آنتی‌گلوبولین (DAT)
• آزمایش غیرمستقیم آنتی‌گلوبولین (IAT)
• حساسیت in vivo در مقابل in vitro
• معرف‌های پلی‌اسپسیفیک و مونواسپسیفیک (IgG, C3)
• آگلوتیناسیون به عنوان نتیجه

Mechanisms

بسیاری از آنتی‌بادی‌های گلبول قرمز از نظر بالینی مهم، از نوع IgG هستند و به طور مستقیم سلول‌های آنتی‌ژن مثبت را در سالین آگلوتینه نمی‌کنند، زیرا مولکول‌ها برای پل زدن بین سلول‌هایی که توسط بار سطحی خود دفع می‌شوند، بسیار کوچک هستند. معرف آنتی‌گلوبولین انسانی که علیه IgG و کمپلمان انسانی تولید شده است، به این مولکول‌های پوشاننده متصل شده و سلول‌های حساس شده مجاور را به هم پل می‌زند و آگلوتیناسیون قابل مشاهده‌ای ایجاد می‌کند. در آزمایش مستقیم، گلبول‌های قرمز شسته شده از بیمار با معرف مخلوط می‌شوند تا آنتی‌بادی یا کمپلمان از قبل متصل شده در شرایط in vivo شناسایی شود، همانطور که در واکنش‌های همولیتیک انتقال خون، بیماری همولیتیک نوزاد و کم‌خونی همولیتیک خودایمنی رخ می‌دهد. در آزمایش غیرمستقیم، پلاسما ابتدا با گلبول‌های قرمز معرف انکوبه می‌شود تا هر آنتی‌بادی در شرایط in vitro متصل شود، سپس معرف آنتی‌گلوبولین اضافه می‌شود؛ این اساس غربالگری آنتی‌بادی، شناسایی و کراس‌مچ آنتی‌گلوبولین است.

Clinical relevance

آزمایش آنتی‌گلوبولین از بررسی آزمایشگاهی همولیز و انتخاب ایمن اجزای خون حمایت می‌کند. این مدخل نحوه عملکرد آزمایش و آنچه نتایج مثبت و منفی در اصل نشان می‌دهند را توصیف می‌کند؛ تفسیر هر نتیجه فردی به بافت بالینی و آزمایشگاهی بستگی دارد و در اینجا به عنوان راهنما مورد بررسی قرار نمی‌گیرد.

Evidence & guidelines

تکنیک آنتی‌گلوبولین و انواع آن در مراجع استاندارد ایمونوهماتولوژی مانند AABB Technical Manual و Mollison's Blood Transfusion in Clinical Medicine توضیح داده شده است که روش و تفسیر را بر اساس اجماع ارائه می‌دهند.

History

کومبس، مورانت و ریس آزمایش آنتی‌گلوبولین را در سال ۱۹۴۵ برای شناسایی آنتی‌بادی‌های ضعیف و ناقص Rh که آگلوتیناسیون سالین معمولی قادر به شناسایی آنها نبود، معرفی کردند. این تکنیک با قابل مشاهده کردن حساسیت IgG، ایمونوهماتولوژی را متحول کرد و همچنان اساس غربالگری آنتی‌بادی، شناسایی، کراس‌مچینگ و بررسی همولیز ایمنی است.

Key figures

• Robert Coombs
• Arthur Mourant
• Robert Race

Seminal works

• coombs-1945
• mollison-2014
• daniels-2013

Frequently asked questions

تفاوت بین آزمایش مستقیم و غیرمستقیم کومبس چیست؟

آزمایش مستقیم آنتی‌بادی یا کمپلمان از قبل متصل به گلبول‌های قرمز بیمار را در بدن شناسایی می‌کند؛ آزمایش غیرمستقیم آنتی‌بادی موجود در پلاسما را با اتصال آن به گلبول‌های قرمز معرف در لوله آزمایش قبل از افزودن معرف آنتی‌گلوبولین شناسایی می‌کند.

چه چیزی می‌تواند باعث مثبت شدن آزمایش مستقیم آنتی‌گلوبولین شود؟

مثبت شدن آزمایش مستقیم آنتی‌گلوبولین نشان‌دهنده پوشیده شدن گلبول‌های قرمز با ایمونوگلوبولین یا کمپلمان است که می‌تواند در کم‌خونی همولیتیک خودایمنی، بیماری همولیتیک نوزاد و واکنش‌های همولیتیک انتقال خون، از جمله موارد دیگر، رخ دهد.