Técnicas citogenéticas y FISH
Las técnicas citogenéticas examinan los cromosomas en busca de anomalías numéricas y estructurales, mientras que la hibridación fluorescente in situ (FISH) utiliza sondas de ADN marcadas para visualizar secuencias específicas directamente dentro de las células o en extensiones cromosómicas. En conjunto, estas técnicas unen el análisis de cromosomas completos con la detección molecular de secuencias específicas.
Definition
Las técnicas citogenéticas y de FISH son métodos que detectan y localizan anomalías cromosómicas y secuencias de ADN específicas dentro de las células, empleando la FISH sondas de ácidos nucleicos marcadas fluorescentemente que se hibridan a secuencias diana complementarias.
Scope
Este tema abarca el cariotipado convencional, la FISH para sondas específicas de locus y de cromosomas, y la hibridación genómica comparada para la evaluación del número de copias a nivel genómico. Se presenta como material de referencia metodológico sobre cómo se visualizan los cambios cromosómicos y subcromosómicos, y no como una guía para pruebas clínicas.
Key concepts
- Cariotipado
- Hibridación fluorescente in situ (FISH)
- Sondas específicas de locus y centroméricas
- Reordenamientos cromosómicos y aneuploidía
- Hibridación genómica comparada (CGH)
- Ganancias y pérdidas del número de copias
- Análisis en interfase versus metafase
Mechanisms
La citogenética convencional detiene las células en división en metafase, extiende y tiñe los cromosomas, y lee el patrón de bandas para detectar anomalías numéricas y estructurales. La FISH, en cambio, aplica sondas de ADN monocatenario marcadas fluorescentemente que se hibridan a sus secuencias diana complementarias en células fijadas; la sonda unida se visualiza mediante microscopía de fluorescencia, localizando una secuencia en un cromosoma o núcleo en interfase (Pinkel et al., 1986). La hibridación genómica comparada extiende este principio a todo el genoma mediante la cohibridación de ADN de prueba y de referencia marcados diferencialmente y la comparación de sus relaciones de fluorescencia para mapear ganancias y pérdidas en el número de copias (Kallioniemi et al., 1992).
Clinical relevance
Estas técnicas se utilizan para detectar anomalías cromosómicas y reordenamientos estructurales relevantes para trastornos constitucionales y adquiridos. Esta entrada describe cómo los métodos visualizan los cromosomas y las secuencias como referencia; no proporciona orientación sobre cómo solicitar o interpretar ninguna prueba citogenética específica en la atención al paciente.
Evidence & guidelines
Los métodos se basan en estudios primarios fundamentales que introdujeron la hibridación fluorescente de alta sensibilidad (Pinkel et al., 1986) y la hibridación genómica comparada para tumores sólidos (Kallioniemi et al., 1992). Los organismos profesionales de citogenética mantienen estándares detallados de ensayo y de informes, los cuales se referencian en la práctica de laboratorio.
History
La citogenética humana maduró a mediados del siglo XX con el recuento y el bandeo cromosómico fiables. La introducción de la hibridación fluorescente in situ cuantitativa y de alta sensibilidad en 1986 añadió una resolución específica de secuencia al análisis cromosómico (Pinkel et al., 1986), y la hibridación genómica comparada en 1992 hizo posibles los estudios del número de copias a nivel genómico (Kallioniemi et al., 1992), anticipando los métodos actuales basados en arrays y secuenciación para el número de copias.
Key figures
- Daniel Pinkel
- Joe W. Gray
- Anne Kallioniemi
Related topics
Seminal works
- pinkel-1986
- kallioniemi-1992
Frequently asked questions
- ¿Qué aporta la FISH al cariotipado convencional?
- El cariotipado muestra cromosomas completos y grandes cambios estructurales, mientras que la FISH utiliza sondas marcadas para detectar secuencias o reordenamientos específicos, incluso en células en interfase no divisoras donde no se puede realizar un cariotipo completo.
- ¿Cómo detecta la hibridación genómica comparada los cambios en el número de copias?
- Cohibrida ADN de prueba y de referencia marcados diferencialmente al mismo objetivo y compara sus relaciones de fluorescencia; las regiones donde la señal de prueba es relativamente más alta o más baja indican ganancias o pérdidas genómicas.