Molekulare Testung und HPV-Nachweis in zytologischen Proben

Die molekulare Testung zytologischer Proben wendet Nukleinsäure-basierte Assays auf Zellen an, die durch Exfoliation oder Aspiration gewonnen wurden, und detektiert dabei DNA- oder RNA-Ziele, die auf Infektionen, Mutationen oder andere klinisch relevante Veränderungen hinweisen. Der Nachweis von Hochrisiko-Humanen Papillomviren (HPV) in zervikalen Zytologieproben ist das am weitesten verbreitete Beispiel, während die Sequenzierung von Feinnadelaspiraten die molekulare Diagnose auf solide Tumoren ausweitet.

Definition

Die molekulare Testung zytologischer Proben ist die Anwendung von Nukleinsäure-basierten Assays – einschließlich des Nachweises viraler Nukleinsäuren und der Profilierung von Tumormutationen – auf Zellen, die mittels exfolierender oder Aspirationszytologie gewonnen wurden, oder auf deren flüssigkeitsbasiertes Restmaterial.

Scope

Der Eintrag behandelt die Verwendung von zytologischem und flüssigkeitsbasiertem Restmaterial als Nukleinsäurequelle, den HPV-Nachweis im Zervix-Screening und breitere molekulare Assays wie die Next-Generation-Sequenzierung an Aspiraten. Es handelt sich um eine methodische und referenzielle Übersicht und bietet keine Screening-Protokolle oder Behandlungsleitlinien.

Core questions

• Welche präanalytischen Faktoren bestimmen, ob zytologisches Material ausreichend Nukleinsäure für die Testung liefert?
• Wie ergänzt der Nachweis von Hochrisiko-HPV die morphologische zervikale Zytologie im Screening?
• Welche molekularen Assays können an Feinnadelaspiraten und Restmaterial aus der Zytologie durchgeführt werden?

Key concepts

• Nukleinsäureextraktion aus zytologischem Material
• Nachweis von Hochrisiko-HPV
• Flüssigkeitsbasierte Zytologie als molekulares Substrat
• Reflex- und Co-Testing-Strategien
• Next-Generation-Sequenzierung an Aspiraten
• Probenadäquanz für molekulare Assays

Mechanisms

Zytologische Proben, insbesondere flüssigkeitsbasierte Präparate, enthalten Zellen und Restflüssigkeit, aus denen DNA und RNA extrahiert werden können; diese Nukleinsäuren werden dann mittels Amplifikations-, Hybridisierungs- oder Sequenzierungsassays untersucht. Bei zervikalen Anwendungen detektieren die Assays die DNA oder RNA von Hochrisiko-HPV-Typen, deren persistierende Infektion der zervikalen Karzinogenese zugrunde liegt, und solche Tests können mit der morphologischen Zytologie kombiniert oder diese ersetzen. In der Zytologie solider Tumoren kann Feinnadelaspiratmaterial ausreichend Nukleinsäure für gezielte oder Next-Generation-Sequenzierung liefern, um diagnostisch oder therapeutisch relevante Veränderungen zu identifizieren.

Clinical relevance

Die molekulare Testung verwandelt eine zytologische Probe in eine Quelle genomischer und viraler Informationen, die zur Klassifikation, Risikostratifizierung und Biomarker-Berichterstattung verwendet werden; insbesondere der HPV-Nachweis hat die Paradigmen des Zervix-Screenings neu gestaltet. Dieser Eintrag beschreibt, wie solche Tests durchgeführt werden; spezifische Screening-Algorithmen und Biomarker-basierte Entscheidungen sind klinische Angelegenheiten und stellen hier keine individualisierte Beratung dar.

Epidemiology

Die persistierende Infektion mit Hochrisiko-HPV-Typen ist die notwendige Ursache nahezu aller Zervixkarzinome, was den Nachweis viraler Nukleinsäuren in zervikalen Zytologieproben zu einem biologisch fundierten Screening-Ziel macht (Schiffman et al., 2007).

Evidence & guidelines

Randomisierte Screening-Evidenz, einschließlich der Endergebnisse der ATHENA-Studie, hat die primäre HPV-Testung als Erstlinien-Screening-Strategie für Zervixkarzinome im Vergleich zu zytologiebasierten Ansätzen evaluiert (Wright et al., 2015). Für solide Tumoren haben Studien gezeigt, dass die Next-Generation-Sequenzierung an Feinnadelaspirat-Zytologieproben durchgeführt werden kann, um molekulare Diagnosen zu erhalten (Qiu et al., 2015).

History

Die Entdeckung, dass Hochrisiko-HPV die notwendige Ursache von Zervixkarzinomen ist, wandelte die zervikale Zytologie von einem rein morphologischen Screening zu einem Ansatz für molekulares Co-Testing und später zu einem primären HPV-Screening. Parallel dazu trieb das Wachstum der gezielten Krebstherapie die Anpassung molekularer und Sequenzierungsassays an die kleinen Proben voran, die durch Feinnadelaspiration gewonnen werden.

Debates

Sollte die primäre HPV-Testung das zytologiebasierte Zervix-Screening ersetzen?

Studien wie ATHENA unterstützen die primäre HPV-Testung als Erstlinien-Screening, aber die optimale Kombination aus HPV-Testung, Zytologie und Triage wird weiterhin diskutiert und variiert je nach Screening-Programm.

Seminal works

• schiffman-2007
• wright-2015

Frequently asked questions

Können molekulare Tests an derselben Probe durchgeführt werden, die für die Zytologie verwendet wurde?

Oft ja; flüssigkeitsbasierte Zytologiepräparate enthalten Restzellen und Flüssigkeit, aus denen Nukleinsäuren extrahiert werden können, was den HPV-Nachweis oder andere molekulare Assays an derselben Probe ermöglicht.

Warum wird die HPV-Testung im Zervixkarzinom-Screening eingesetzt?

Die persistierende Infektion mit Hochrisiko-HPV-Typen ist die notwendige Ursache nahezu aller Zervixkarzinome, daher identifiziert der Nachweis viraler Nukleinsäuren die Risikopopulation und ergänzt oder geht in einigen Programmen der morphologischen Zytologie voraus.