标本固定与染色

固定和染色是将沉积的细胞学样本转化为可解读载玻片的两个化学步骤。固定可稳定细胞并保存其内部结构；染色则赋予细胞颜色和对比度，使细胞病理学家能够区分细胞核和细胞质，并读取染色质细节。固定方法与染色的搭配是经过深思熟虑的选择，它决定了哪些细胞特征会得到强调。

Definition

标本固定和染色是制备步骤，通过固定保存细胞形态，并通过染色赋予细胞组分选择性颜色，以便在显微镜下读取细胞学载玻片。

Scope

本条目解释了细胞学标本为何以及如何进行固定（湿固定与刻意风干），主要细胞学染色的原理，以及如何根据诊断问题匹配固定-染色组合。它是一个方法层面的参考，不提供针对患者的说明。

Key concepts

• 凝固性酒精固定和湿固定
• 刻意风干作为制备状态
• 核染色与细胞质染色
• 巴氏染色（透明、多色）
• 用于风干涂片的罗曼诺夫斯基染色
• 干燥伪影及其对核细节的影响
• 盖玻片、透明和载玻片持久性

Mechanisms

固定可阻止自溶并固定细胞蛋白质和核酸。在细胞学中，主要的固定剂是乙醇或醇基喷雾，在涂片仍湿润时应用（湿固定），这可以保存巴氏染色所需的精细核染色质。或者，涂片被允许风干，这种状态会使细胞变平并增大，是罗曼诺夫斯基染色的必要制备。染色则利用带电染料对细胞组分的亲和力：碱性（阳离子）染料结合酸性核染色质，而酸性（阴离子）染料则使细胞质蛋白着色。巴氏染色将核苏木精与多种复染剂结合，形成透明、多色的细胞；罗曼诺夫斯基染色结合了天青和伊红染料，它们的相互作用产生特征性的紫色染色质和异染性颜色（Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006）。

Clinical relevance

由于固定和染色决定了用于细胞分类的特征的可见性，因此它们与细胞学诊断和报告密不可分。本条目描述了这些方法及其原理，作为理解实验室实践的背景；它不是个体临床决策的基础。

Evidence & guidelines

方法学文献确立了两大染色家族的互补作用——用于核和染色质细节的酒精固定巴氏染色，以及用于细胞质和背景特征的风干罗曼诺夫斯基染色——Wittekind的标准化工作将天青B-伊红Y组合定义为参考罗曼诺夫斯基-吉姆萨染色（Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014）。参考文本强调，固定时间和质量是染色结果以及干燥引起的核变形等伪影的主要可控决定因素（Koss & Melamed 2006）。

History

细胞学染色起源于19世纪的组织化学以及罗曼诺夫斯基和吉姆萨的血液学染色，随后在20世纪40年代被巴氏用于湿固定涂片的多色透明染色法改造，应用于脱落细胞学。20世纪后期的工作，包括Wittekind的染料标准化研究，旨在使罗曼诺夫斯基染色在不同实验室之间具有可重复性（Papanicolaou 1942; Wittekind 1982）。

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

为什么有些细胞学涂片必须在仍湿润时固定？

湿（酒精）固定可保存巴氏染色所依赖的精细核染色质细节。如果此类涂片在固定前干燥，干燥伪影会使细胞核变形并降低判读质量。

什么决定了细胞学标本采用哪种染色？

这取决于固定状态和诊断问题：湿固定涂片采用巴氏染色以观察核细节，而刻意风干的涂片则采用罗曼诺夫斯基染色以突出细胞质和背景特征。