Các Phương pháp Thử nghiệm Độ nhạy Kháng sinh

Thử nghiệm độ nhạy kháng sinh (AST) là tập hợp các phương pháp xét nghiệm tiêu chuẩn được sử dụng để xác định xem một vi sinh vật có bị ức chế hoặc tiêu diệt bởi một tác nhân kháng khuẩn ở nồng độ nào hay không. Kết quả của nó, thường là nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) hoặc đường kính vùng ức chế, được diễn giải dựa trên các điểm cắt đã công bố để phân loại vi sinh vật là nhạy cảm, trung gian hoặc kháng thuốc.

Definition

Thử nghiệm độ nhạy kháng sinh là phép đo tiêu chuẩn hóa phản ứng in vitro của một vi sinh vật đối với các tác nhân kháng khuẩn, được biểu thị bằng MIC hoặc đường kính vùng ức chế và được diễn giải dựa trên các điểm cắt để gán một phân loại nhạy cảm, trung gian hoặc kháng thuốc.

Scope

Mục này bao gồm các phương pháp AST chính, các đại lượng mà chúng đo lường và cách diễn giải kết quả. Nó đề cập đến các phương pháp pha loãng (pha loãng vi lỏng trong môi trường canh thang, pha loãng trên thạch), các phương pháp khuếch tán (khuếch tán đĩa, dải gradient) và các hệ thống tự động, cùng với các hệ thống điểm cắt của CLSI và EUCAST. Đây là nội dung về phương pháp luận và không cung cấp khuyến nghị về liều lượng hoặc điều trị.

Core questions

• Nồng độ kháng sinh nào ức chế sự phát triển của vi sinh vật này?
• Các phương pháp pha loãng và khuếch tán khác nhau như thế nào về những gì chúng đo lường và cách chúng được đọc?
• Làm thế nào để một MIC hoặc đường kính vùng đo được chuyển thành một phân loại lâm sàng?

Key concepts

• Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC)
• Pha loãng vi lỏng trong môi trường canh thang (phương pháp tham chiếu)
• Pha loãng trên thạch
• Khuếch tán đĩa (Kirby-Bauer)
• Khuếch tán gradient (dải gradient MIC)
• Đường kính vùng ức chế
• Điểm cắt lâm sàng (CLSI, EUCAST)
• Các phân loại nhạy cảm-trung gian-kháng thuốc
• Các chủng kiểm soát chất lượng và lượng cấy chuẩn

Mechanisms

Các phương pháp AST có chung một logic: một lượng cấy chuẩn của vi sinh vật được tiếp xúc với nồng độ kháng sinh xác định trong điều kiện kiểm soát, và sự ức chế tăng trưởng được đọc. Các phương pháp pha loãng (pha loãng vi lỏng trong môi trường canh thang, được coi là phương pháp tham chiếu, và pha loãng trên thạch) xác định nồng độ thấp nhất ức chế sự tăng trưởng có thể nhìn thấy, tức là MIC. Các phương pháp khuếch tán đặt thuốc vào thạch để thuốc khuếch tán tạo thành gradient nồng độ: khuếch tán đĩa đọc đường kính vùng ức chế, trong khi dải gradient đọc MIC tại điểm mà hình elip ức chế cắt một thang đo đã hiệu chuẩn. Các hệ thống thương mại tự động tạo ra MIC từ phương pháp pha loãng canh thang thu nhỏ và phát hiện tăng trưởng bằng quang học hoặc đo độ đục. Kết quả được diễn giải dựa trên các điểm cắt từ CLSI hoặc EUCAST, và các quy tắc chuyên gia kiểm tra chéo kết quả để đảm bảo tính nhất quán với các kiểu hình kháng thuốc đã biết (jorgensen-2009; leclercq-2013; clsi-m100; eucast-breakpoints).

Clinical relevance

Kết quả độ nhạy cung cấp thông tin cho việc quản lý bệnh truyền nhiễm, quản lý kháng sinh và giám sát, và chúng điền vào các kháng sinh đồ tích lũy mà các phòng thí nghiệm báo cáo. Mục này giải thích cách các kết quả đó được tạo ra và diễn giải như tài liệu tham khảo; nó không phải là nguồn đưa ra các quyết định chẩn đoán hoặc kê đơn cá nhân.

Epidemiology

Vì AST được tiêu chuẩn hóa, kết quả có thể so sánh được giữa các phòng thí nghiệm và theo thời gian, cho phép tổng hợp thành các kháng sinh đồ cục bộ và vào hệ thống giám sát kháng thuốc quốc gia và quốc tế. Việc lựa chọn phương pháp, phiên bản điểm cắt và kiểm soát chất lượng đều ảnh hưởng đến khả năng so sánh của các dữ liệu này (clsi-m100; eucast-breakpoints).

History

Thử nghiệm độ nhạy phát triển trong những thập kỷ sau khi kháng sinh được giới thiệu. Phương pháp khuếch tán đĩa được tiêu chuẩn hóa vào những năm 1960 và trở nên được sử dụng rộng rãi vì sự đơn giản của nó, trong khi pha loãng canh thang và thạch cung cấp MIC định lượng. Theo thời gian, các cơ quan tiêu chuẩn, đáng chú ý là CLSI ở Hoa Kỳ và EUCAST ở Châu Âu, đã chính thức hóa các phương pháp, điểm cắt và kiểm soát chất lượng, và các hệ thống tự động cùng dải gradient đã mở rộng thực hành thường quy (jorgensen-2009).

Debates

Sự khác biệt giữa các điểm cắt của CLSI và EUCAST

CLSI và EUCAST đặt ra các điểm cắt bằng cách sử dụng các quy trình liên quan nhưng khác biệt, và các phân loại của chúng cũng như định nghĩa về phân loại trung gian có thể khác nhau; việc hài hòa và diễn giải các kết quả không nhất quán là những vấn đề phương pháp luận đang diễn ra.

Khả năng tái lập gần các điểm cắt

Các MIC đo được có sự biến thiên vốn có, do đó các kết quả gần điểm cắt có thể được phân loại khác nhau giữa các lần lặp lại hoặc các phương pháp, điều này làm phức tạp việc diễn giải các vi sinh vật ở ranh giới.

Seminal works

• jorgensen-2009
• leclercq-2013
• clsi-m100

Frequently asked questions

Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) là gì?

MIC là nồng độ kháng sinh thấp nhất ngăn chặn sự phát triển có thể nhìn thấy của một vi sinh vật trong điều kiện tiêu chuẩn; đó là kết quả định lượng mà các phương pháp pha loãng nhằm xác định.

Tại sao có các phương pháp AST khác nhau?

Các phương pháp pha loãng cho MIC số, các phương pháp khuếch tán như khuếch tán đĩa đơn giản và không tốn kém, và các hệ thống tự động mang lại tốc độ và thông lượng; các phòng thí nghiệm lựa chọn giữa chúng dựa trên vi sinh vật, thuốc được thử nghiệm và các nguồn lực sẵn có.

Nhạy cảm, trung gian và kháng thuốc có nghĩa là gì?

Chúng là các phân loại diễn giải được gán bằng cách so sánh MIC hoặc đường kính vùng đo được với các điểm cắt do các cơ quan tiêu chuẩn đặt ra; chúng tóm tắt khả năng một vi sinh vật sẽ đáp ứng với một tác nhân trong điều kiện thông thường và được định nghĩa theo phương pháp luận chứ không phải là lời khuyên điều trị.