Cố định và Nhuộm mẫu vật

Cố định và nhuộm là hai bước hóa học biến một mẫu tế bào học đã được phết thành một lam kính có thể diễn giải được. Cố định giúp ổn định tế bào và bảo tồn cấu trúc bên trong của chúng; nhuộm sau đó tạo ra màu sắc và độ tương phản cho phép nhà tế bào bệnh học phân biệt nhân với bào tương và đọc chi tiết chất nhiễm sắc.

Definition

Cố định và nhuộm mẫu vật là các bước chuẩn bị giúp bảo tồn hình thái tế bào (cố định) và tạo màu chọn lọc cho các thành phần tế bào (nhuộm) để có thể đọc lam kính tế bào học dưới kính hiển vi.

Scope

Mục này giải thích lý do và cách thức cố định mẫu tế bào học (cố định ướt so với làm khô trong không khí có chủ đích), các nguyên tắc của các phương pháp nhuộm tế bào học chính, và cách kết hợp phương pháp cố định-nhuộm phù hợp với câu hỏi chẩn đoán. Đây là tài liệu tham khảo cấp độ phương pháp và không đưa ra hướng dẫn cụ thể cho bệnh nhân.

Key concepts

• Cố định cồn đông tụ và cố định ướt
• Làm khô trong không khí có chủ đích như một trạng thái chuẩn bị
• Nhuộm nhân so với nhuộm bào tương
• Phương pháp nhuộm Papanicolaou (trong suốt, đa sắc)
• Các phương pháp nhuộm Romanowsky cho các phết khô trong không khí
• Hiện vật do khô và ảnh hưởng của nó đến chi tiết nhân
• Đậy lam, làm trong và độ bền của lam

Mechanisms

Cố định ngăn chặn quá trình tự phân hủy và giữ cố định các protein và axit nucleic của tế bào. Trong tế bào học, chất cố định chủ yếu là ethanol hoặc dung dịch xịt gốc cồn được áp dụng khi phết vẫn còn ướt (cố định ướt), giúp bảo tồn chất nhiễm sắc nhân mịn cần thiết cho phương pháp nhuộm Papanicolaou. Ngoài ra, một phết có thể được để khô trong không khí, trạng thái này làm dẹt và phóng to tế bào và là bước chuẩn bị cần thiết cho các phương pháp nhuộm Romanowsky. Nhuộm sau đó khai thác ái lực của các thuốc nhuộm tích điện đối với các thành phần tế bào: thuốc nhuộm kiềm (cationic) liên kết với chất nhiễm sắc nhân có tính axit, trong khi thuốc nhuộm axit (anionic) tạo màu cho protein bào tương. Phương pháp nhuộm Papanicolaou kết hợp haematoxylin nhân với nhiều thuốc nhuộm đối màu để tạo ra các tế bào trong suốt, đa sắc; các phương pháp nhuộm Romanowsky kết hợp thuốc nhuộm azure và eosin mà sự tương tác của chúng tạo ra chất nhiễm sắc màu tím đặc trưng và màu dị sắc (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).

Clinical relevance

Vì cố định và nhuộm thiết lập khả năng hiển thị của các đặc điểm được sử dụng để phân loại tế bào, chúng không thể tách rời khỏi chẩn đoán và báo cáo tế bào học. Mục này mô tả các phương pháp và cơ sở lý luận của chúng làm nền tảng để hiểu thực hành phòng thí nghiệm; nó không phải là cơ sở cho các quyết định lâm sàng cá nhân.

Evidence & guidelines

Tài liệu phương pháp luận đã thiết lập vai trò bổ sung của hai họ thuốc nhuộm lớn - phương pháp nhuộm Papanicolaou cố định bằng cồn cho chi tiết nhân và chất nhiễm sắc, và các phương pháp nhuộm Romanowsky làm khô trong không khí cho các đặc điểm bào tương và nền - và công trình tiêu chuẩn hóa của Wittekind đã định nghĩa sự kết hợp azure B-eosin Y là một phương pháp nhuộm Romanowsky-Giemsa tham chiếu (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). Các văn bản tham khảo nhấn mạnh rằng thời gian và chất lượng cố định là những yếu tố quyết định có thể kiểm soát chính đối với kết quả nhuộm và các hiện vật như biến dạng nhân do khô (Koss & Melamed 2006).

History

Nhuộm tế bào học phát triển từ hóa mô học thế kỷ XIX và các phương pháp nhuộm huyết học của Romanowsky và Giemsa, sau đó được biến đổi cho tế bào học bong tróc bằng phương pháp nhuộm đa sắc, trong suốt của Papanicolaou cho các phết cố định ướt vào những năm 1940. Công trình cuối thế kỷ XX, bao gồm các nghiên cứu tiêu chuẩn hóa thuốc nhuộm của Wittekind, đã tìm cách làm cho phương pháp nhuộm Romanowsky có thể tái tạo được giữa các phòng thí nghiệm (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

Tại sao một số phết tế bào học phải được cố định khi vẫn còn ướt?

Cố định ướt (cồn) bảo tồn chi tiết chất nhiễm sắc nhân mịn mà phương pháp nhuộm Papanicolaou phụ thuộc vào. Nếu một phết như vậy khô trước khi cố định, hiện vật do khô sẽ làm biến dạng nhân và làm giảm chất lượng diễn giải.

Điều gì quyết định mẫu tế bào học sẽ được nhuộm bằng phương pháp nào?

Điều này được xác định bởi trạng thái cố định và câu hỏi chẩn đoán: các phết cố định ướt sử dụng phương pháp nhuộm Papanicolaou để xem chi tiết nhân, trong khi các phết được làm khô trong không khí có chủ đích sử dụng phương pháp nhuộm Romanowsky làm nổi bật các đặc điểm bào tương và nền.