Antimikrobiyal Duyarlılık Test Yöntemleri
Antimikrobiyal duyarlılık testi (AST), bir mikroorganizmanın antimikrobiyal bir ajan tarafından hangi konsantrasyonda inhibe edildiğini veya öldürüldüğünü belirlemek için kullanılan standartlaştırılmış laboratuvar yöntemleri bütünüdür. Çıktıları, genellikle minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) veya bir inhibisyon zon çapı, organizmayı duyarlı, orta duyarlı veya dirençli olarak sınıflandırmak için yayımlanmış kırılma noktalarına göre yorumlanmaktadır.
Tanım
Antimikrobiyal duyarlılık testi, bir mikroorganizmanın antimikrobiyal ajanlara karşı in vitro yanıtının, MİK veya zon çapı olarak ifade edilen ve duyarlı, orta duyarlı veya dirençli bir kategori atamak için kırılma noktalarına göre yorumlanan standartlaştırılmış bir ölçümüdür.
Kapsam
Bu madde, başlıca AST yöntemlerini, ölçtükleri nicelikleri ve sonuçların nasıl yorumlandığını kapsamaktadır. Seyreltme yöntemlerini (buyyon mikrodilüsyonu, agar dilüsyonu), difüzyon yöntemlerini (disk difüzyonu, gradyan şerit) ve otomatik sistemleri, CLSI ve EUCAST'ın kırılma noktası sistemleriyle birlikte ele almaktadır. Metodolojik bir içeriğe sahiptir ve dozaj veya tedavi önerileri sunmamaktadır.
Temel sorular
- Bir antimikrobiyalin hangi konsantrasyonu bu organizmanın büyümesini inhibe eder?
- Seyreltme ve difüzyon yöntemleri, neyi ölçtükleri ve nasıl okundukları açısından nasıl farklılık gösterir?
- Ölçülen bir MİK veya zon çapı klinik bir kategoriye nasıl çevrilir?
Anahtar kavramlar
- Minimum İnhibitör Konsantrasyon (MİK)
- Buyyon Mikrodilüsyonu (referans yöntem)
- Agar Dilüsyonu
- Disk Difüzyonu (Kirby-Bauer)
- Gradyan Difüzyonu (MİK gradyan şeridi)
- İnhibisyon Zon Çapı
- Klinik Kırılma Noktaları (CLSI, EUCAST)
- Duyarlı-Orta Duyarlı-Dirençli Kategoriler
- Kalite Kontrol Suşları ve Standartlaştırılmış İnokulum
Mekanizmalar
AST yöntemleri ortak bir mantığı paylaşmaktadır: organizmanın standartlaştırılmış bir inokulumu, kontrollü koşullar altında belirli antimikrobiyal konsantrasyonlara maruz bırakılmakta ve büyüme inhibisyonu okunmaktadır. Seyreltme yöntemleri (referans yöntem olarak kabul edilen buyyon mikrodilüsyonu ve agar dilüsyonu), görünür büyümeyi inhibe eden en düşük konsantrasyonu, yani MİK'i belirlemektedir. Difüzyon yöntemleri, ilacı agara yerleştirerek bir konsantrasyon gradyanı oluşturacak şekilde yayılmasını sağlamaktadır: disk difüzyonu inhibisyon zonunun çapını okurken, gradyan şeritler inhibisyon elipsinin kalibre edilmiş bir ölçekle kesiştiği noktadaki MİK'i okumaktadır. Otomatik ticari sistemler, minyatürleştirilmiş buyyon dilüsyonu ve optik veya turbidimetrik büyüme tespiti yoluyla MİK'ler üretmektedir. Sonuçlar, CLSI veya EUCAST'tan alınan kırılma noktalarına göre yorumlanmakta ve uzman kurallar, bilinen direnç fenotipleriyle tutarlılık açısından sonuçları çapraz kontrol etmektedir (jorgensen-2009; leclercq-2013; clsi-m100; eucast-breakpoints).
Klinik önem
Duyarlılık sonuçları, enfeksiyon hastalıkları yönetimi, antimikrobiyal stewardship ve sürveyans için bilgi sağlamakta ve laboratuvarların raporladığı kümülatif antibiyogramları oluşturmaktadır. Bu madde, bu sonuçların nasıl üretildiğini ve referans materyal olarak nasıl yorumlandığını açıklamaktadır; bireysel tanı veya reçeteleme kararları için bir kaynak değildir.
Epidemiyoloji
AST standartlaştırıldığı için, sonuçlar laboratuvarlar arasında ve zaman içinde karşılaştırılabilir olmakta, yerel antibiyogramlara ve ulusal ve uluslararası direnç sürveyansına toplanmasını sağlamaktadır. Yöntem seçimi, kırılma noktası versiyonu ve kalite kontrolü, bu verilerin karşılaştırılabilirliğini etkilemektedir (clsi-m100; eucast-breakpoints).
Tarihçe
Duyarlılık testi, antibiyotiklerin tanıtılmasından sonraki on yıllarda gelişmiştir. Disk difüzyon yöntemi 1960'larda standartlaştırılmış ve basitliği nedeniyle yaygın olarak kullanılmaya başlanmıştır; buyyon ve agar dilüsyonu ise kantitatif MİK'ler sağlamıştır. Zamanla, başta Amerika Birleşik Devletleri'ndeki CLSI ve Avrupa'daki EUCAST olmak üzere standart kuruluşları, yöntemleri, kırılma noktalarını ve kalite kontrolünü resmileştirmiş ve otomatik sistemler ile gradyan şeritler rutin uygulamayı genişletmiştir (jorgensen-2009).
Tartışmalar
- CLSI ve EUCAST kırılma noktaları arasındaki farklılıklar
- CLSI ve EUCAST, ilişkili ancak farklı süreçler kullanarak kırılma noktalarını belirlemektedir ve kategorizasyonları ile orta duyarlı kategorinin tanımı farklılık gösterebilmektedir; uyumlaştırma ve çelişkili sonuçların yorumlanması devam eden metodolojik sorunlardır.
- Kırılma noktalarına yakın yerlerde tekrarlanabilirlik
- Ölçülen MİK'ler doğuştan bir değişkenlik taşımaktadır, bu nedenle bir kırılma noktasına yakın sonuçlar, tekrarlar veya yöntemler arasında farklı şekilde kategorize edilebilmekte, bu da sınırda organizmaların yorumlanmasını zorlaştırmaktadır.
İlgili konular
Temel eserler
- jorgensen-2009
- leclercq-2013
- clsi-m100
Sıkça sorulan sorular
- Minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) nedir?
- MİK, standartlaştırılmış koşullar altında bir organizmanın görünür büyümesini engelleyen bir antimikrobiyalin en düşük konsantrasyonudur; seyreltme yöntemlerinin belirlemeyi amaçladığı kantitatif sonuçtur.
- Neden farklı AST yöntemleri vardır?
- Seyreltme yöntemleri sayısal bir MİK verirken, disk difüzyonu gibi difüzyon yöntemleri basit ve ucuzdur ve otomatik sistemler hız ve verimlilik sunmaktadır; laboratuvarlar organizmaya, test edilen ilaçlara ve mevcut kaynaklara göre bunlar arasından seçim yapmaktadır.
- Duyarlı, orta duyarlı ve dirençli ne anlama gelir?
- Bunlar, ölçülen bir MİK veya zon çapının standart kuruluşlar tarafından belirlenen kırılma noktalarıyla karşılaştırılmasıyla atanan yorumlayıcı kategorilerdir; bir organizmanın olağan koşullar altında bir ajana yanıt verme olasılığını özetler ve tedavi tavsiyesi olarak değil, metodolojik olarak tanımlanmaktadır.