Plak İndirgeme Nötralizasyon Testi — PRNT
Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) · Ayrıca şöyle bilinir: PRNT, plaque neutralization assay, neutralization plaque assay, serum neutralization plaque test
Plak İndirgeme Nötralizasyon Testi (PRNT), veteriner ve insan virolojisinde, bir serum örneğindeki antikorların canlı bir virüsü nötralize etme yeteneğini ölçmek için kullanılan kantitatif bir hücre bazlı serolojik testtir. Monolayer üzerinde hücre yıkım alanları olan görünür plaklar sayıldığında, yöntem viral enfektivitenin %50 veya %90 oranında azaldığı serum titrasyonunu belirler, bu da onu birçok RNA ve DNA virüsüne karşı nötralize edici antikorları tespit etmek ve ölçmek için altın standart teknik haline getirir.
Tam yöntemi oku
Bu bölümü okumak için ücretsiz hesapla giriş yapın.
Ne zaman kullanılır
PRNT, biyolojik olarak anlamlı, yüksek derecede spesifik bir virüs nötralize edici antikor ölçümü gerektiğinde tercih edilen yöntemdir - örneğin, aşılamadan sonra serokonversiyonu doğrulamak, yakından ilişkili flavivirüslerden (dengue serotipleri, Batı Nil virüsü, Zika virüsü) antikorları ayırt etmek veya sürveyans çalışmalarında tanısal temel titrasyonları oluşturmak için. Canlı virüsün mevcut olduğu, BSL-2 veya BSL-3 korumasının sağlanabildiği ve 5-14 günlük inkübasyon süresinin kabul edilebilir olduğu durumlarda uygundur. PRNT, yalnızca inaktive edilmiş antijenin mevcut olduğu, hızlı sonuçların kritik olduğu veya binlerce örneğin yüksek verimli taranmasının gerektiği durumlarda uygun değildir - bu durumlarda ELISA veya mikro nötralizasyon testleri tercih edilir.
Güçlü yönler & sınırlılıklar
- Altın standart özgüllük: sadece hücrelere virüs girişini işlevsel olarak engelleyen antikorları tespit eder, sadece bağlanma antikorlarını değil.
- Kantitatif hassasiyet: titre son noktası (PRNT50 veya PRNT90), nötralize edici kapasitenin sürekli, biyolojik olarak anlamlı bir ölçüsünü sağlar.
- Yakından ilişkili virüsleri ayırt eder - flavivirüs serolojisi için esastır, burada çapraz reaktif ELISA sonuçları yaygındır.
- Sitopatik etkisi olan çok çeşitli zarflı ve zarfsız virüslere uygulanabilir.
- Standardize edilmiş referans serumları ve protokoller kullanıldığında sonuçlar uluslararası düzeyde karşılaştırılabilir.
- Canlı, bulaşıcı virüs ve uygun biyogüvenlik koruması (patojene bağlı olarak BSL-2 veya BSL-3) gerektirir.
- İşgücü yoğun ve yavaş - tek bir çalışma genellikle serum hazırlığından nihai plak sayımlarına kadar 5-14 gün sürer.
- Düşük verim: önemli kaynak yatırımı olmadan büyük seroprevalans anketlerine ölçeklendirmek zordur.
- Hücre hatları, virüs stokları, kaplama ortamları veya boyama protokolleri farklıysa sonuçlar laboratuvarlar arasında değişebilir.
SSS
PRNT50 ve PRNT90 arasındaki fark nedir?
Her ikisi de plak sayımlarını yalnızca virüs kontrolüne kıyasla azalttığı serum seyreltmesini ifade eder, ancak farklı sıkılık seviyelerinde. PRNT50, plakların %50 oranında azaldığı titre; PRNT90 ise %90 azalma gerektirir ve bu nedenle daha zorlu, daha spesifik bir son noktadır. PRNT90, flavivirüs serolojisi için tercih edilir çünkü tip-spesifik antikorları çapraz reaktif antikorlardan daha iyi ayırt eder, ancak aynı zamanda daha düşük (daha az hassas) raporlanmış titreler verir.
PRNT, rutin tanı için ELISA ile değiştirilebilir mi?
ELISA daha hızlı ve daha yüksek verimlidir, bu da onu ilk tarama için uygun kılar. Ancak ELISA, nötralize edici antikorları değil, bağlanma antikorlarını tespit eder ve ilgili virüsler arasındaki çapraz reaktiviteye daha yatkındır. PRNT, genellikle pozitif veya belirsiz ELISA sonuçlarını doğrulamak, çapraz reaktif desenleri çözmek veya biyolojik olarak anlamlı bir nötralize edici titre gerektiğinde - örneğin, aşı etkinliği çalışmalarında veya düzenleyici başvurularda kullanılır.
En sık hangi hücre hatları kullanılır?
Vero hücreleri (Afrika yeşil maymunu böbreği), geniş bir arbovirüs yelpazesini destekledikleri, düzgün monolayerler oluşturdukları ve iyi tanımlanmış plaklar ürettikleri için PRNT için en yaygın kullanılan hücre hattıdır. BHK-21 (bebek hamster böbreği) hücreleri, şap virüsü ve bazı bunyavirüsler için yaygın olarak kullanılır. Sürekli hücre hatlarında verimli çoğalmayan virüsler için primer veya sekonder hücre kültürleri gerekebilir.
Bir PRNT, numune alımından sonuca kadar ne kadar sürer?
Zaman çizelgesi öncelikle virüs büyüme kinetiğine bağlıdır. Bazı alfavirüsler gibi hızlı çoğalan virüsler için plaklar 2-4 gün içinde okunabilir. Dengue ve Batı Nil virüsü için tipik olarak 6-10 gün sürer. Şap virüsü sonuçları 48-72 saat içinde okunabilir. Serum hazırlama, kaplama kaldırma, fiksasyon ve sayım eklenerek, çoğu veteriner PRNT uygulaması için pratik sonuç verme süresi, numune alımından nihai raporlanan titreye kadar 5-14 gündür.
Kaynaklar
- Dulbecco, R., & Vogt, M. (1954). Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses. Journal of Experimental Medicine, 99(2), 167–182. DOI: 10.1084/jem.99.2.167 ↗
- Roehrig, J. T., Hombach, J., & Barrett, A. D. T. (2008). Guidelines for plaque-reduction neutralization testing of human antibodies to dengue viruses. Viral Immunology, 21(2), 123–132. DOI: 10.1089/vim.2008.0007 ↗
Bu sayfayı kaynak gösterin
ScholarGate. (2026, June 3). Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT). ScholarGate. https://scholargate.app/tr/veterinary-science/plaque-reduction-neutralization-test