Hemaglutinasyon İnhibisyon Deneyi — HI / HAI Testi
Hemagglutination Inhibition Assay · Ayrıca şöyle bilinir: HI assay, HAI test, haemagglutination inhibition test, HI test
Hemaglutinasyon İnhibisyon (HI) Deneyi, hemaglutine edici virüslere — en önemlisi influenza ve Newcastle hastalığı virüsü — karşı antikorları hayvan ve insan serumunda saptamak ve ölçmek için kullanılan klasik bir serolojik testtir. Veterinerlik teşhisinde, aşı etkinliği değerlendirmesinde ve epidemiyolojik sürveyansda yaygın olarak kullanılır, serumdaki spesifik antikorların bilinen miktarda virüsün kırmızı kan hücrelerini aglütine etmesini engelleyeceği prensibine dayanır.
Tam yöntemi oku
Bu bölümü okumak için ücretsiz hesapla giriş yapın.
Yöntem haritası
İlişkili yöntemlerin komşuluğu — keşfetmek için bir düğüm seçin.
Ne zaman kullanılır
HI deneyi, serumdaki virüse özgü antikorları saptamak ve hemaglutine edici bir virüse karşı titrasyonlarını ölçmek amaçlandığında uygundur. Veteriner ve halk sağlığı ortamlarında influenza (H1–H16 alt tipleri), Newcastle hastalığı virüsü ve diğer bazı paramiksovirüsler ve ortobunyamiksovirüsler için antikor yanıtlarını ölçmek için referans yöntemdir. Aşı sonrası izleme, seroprevalans anketleri ve suşa özgü bağışıklık değerlendirmeleri için kullanın. Deney, bilinen, güvenli bir viral antijen gerektirir; hemaglutine etmeyen patojenler için uygun değildir. Yüksek patojenik suşlar (örneğin, HPAI H5N1) için antijen bir BSL-3 tesisinde hazırlanmalıdır, bu da rutin kullanımı sınırlar.
Güçlü yönler & sınırlılıklar
- İnfluenza ve Newcastle hastalığı için altın standart serolojik yöntem: WOAH tarafından uluslararası düzeyde standartlaştırılmış ve düzenleyici kurumlar tarafından yaygın olarak kabul edilmiştir.
- Doğal olarak alt tipe özgüdür — farklı hemaglutinin antijenleri, çapraz reaktif ELISA'ların ayıramadığı H1, H3, H5 ve diğer alt tiplere karşı antikorları ayırt eder.
- Düşük ekipman gereksinimi — bir mikroplaka, çok kanallı bir pipet ve bir ışık kutusu yeterlidir; gelişmiş bir donanım gerekmez.
- Kantitatif çıktı — titrasyon, birçok türde koruma ile ilişkili bağışıklık durumunun sürekli bir ölçüsünü sağlar.
- Yüksek verim — tek bir eğitimli teknisyen standart 96 kuyucuklu plakalarda günde yüzlerce numune işleyebilir.
- Canlı veya inaktive edilmiş viral antijenin elleçlenmesini gerektirir, bu da özellikle yüksek patojeniteye sahip suşlar için uygun biyogüvenlik altyapısı gerektirir.
- Bazı hayvan serumlarındaki (örneğin, atlar, domuzlardan) spesifik olmayan inhibitörler, serumlar reseptör yok edici enzim (RDE) veya kaolin ile ön işlemden geçirilmediği sürece yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir.
- Deney yalnızca hemaglutinin yüzey proteinine karşı yöneltilmiş antikorları saptar; nöraminidaz veya nükleoprotein antikorları buna karşı görünmezdir.
- Antijen titrasyonu ve KB hazırlığındaki laboratuvarlar arası değişkenlik, titrasyon değerlerini bir ila iki iki katlı seyreltme adımı kaydırabilir, bu da çalışmalar arası karşılaştırmaları zorlaştırır.
SSS
HI titresi ile virüs nötralizasyon titresi arasındaki fark nedir?
Her ikisi de antikor aracılı virüs inhibisyonunu ölçer, ancak farklı mekanizmalarla. HI deneyi, hemaglutininin kırmızı kan hücrelerine bağlanmasını engelleyen antikorları saptar — canlı hücre enfeksiyonu gerektirmez, bu nedenle inaktive edilmiş antijenle standart laboratuvar ortamlarında gerçekleştirilebilir. Virüs nötralizasyon testleri (VNT), virüsün kültürdeki canlı hücreleri enfekte etmesini önleyen antikorları ölçer, bu da hücre kültürü altyapısı ve tehlikeli suşlar için BSL-3 kapsama alanı gerektirir. HI titrasyonları ve VNT titrasyonları genellikle korelasyonludur ancak sayısal olarak eşdeğer değildir.
Antijen neden tam olarak 4 HAU'ya kadar titre edilmelidir?
4 HAU standardı, 1 HAU uç noktasına göre kasıtlı bir fazlalıktır: tekrarlanabilir, tutarlı bir zorluk dozu sağlar, böylece sadece antikor — antijen konsantrasyonundaki rastgele varyasyon değil — aglütinasyonun inhibe edilip edilmediğini belirler. Daha fazla antijen kullanmak deneyi yanlış bir şekilde duyarsız hale getirir (fazla virüsü inhibe etmek için yüksek titrasyonlar gerekir); daha az kullanmak antijen-sadece kontrolünde eksik aglütinasyon ve belirsiz sonuçlar riski taşır.
1:40 HI titresi pratikte ne anlama gelir?
1:40 titresi, serumun 40 kat seyreltildiğinde bile hemaglutinasyonu inhibe ettiği anlamına gelir. İnfluenza serolojisinde bu değer — yaklaşık 5.3 log2 titrasyonuna eşdeğerdir — WHO ve düzenleyici kurumlar tarafından insanlarda koruma korelasyonu olarak kabul edilen, yaygın olarak kullanılan seroproteksiyon eşiğidir. Kanatlılarda, WOAH yönergeleri benzer eşikler kullanır ancak koruyucu titrasyon türe ve aşı suşuna göre değişebilir.
HI deneyi aşılanmış ve doğal olarak enfekte olmuş hayvanları ayırt edebilir mi?
Tek başına değil. HI deneyi yalnızca hemaglutinatine karşı antikorları ölçer. DIVA (Enfekte Olan ve Aşılanan Hayvanları Ayırt Etme) stratejileri, HI testini bir nükleoprotein bazlı ELISA ile eşleştirir: inaktive edilmiş tam virüs aşıları ile aşılanmış kuşlar hem HI hem de NP antikorları geliştirir, oysa DIVA aşıları yalnızca bir antijen ifade eder, bu da yardımcı ELISA'nın iki grubu ayırt etmesini sağlar.
Kaynaklar
- Hirst, G. K. (1942). The quantitative determination of influenza virus and antibodies by means of red cell agglutination. Journal of Experimental Medicine, 75(1), 49–64. DOI: 10.1084/jem.75.1.49 ↗
- World Organisation for Animal Health (WOAH/OIE). (2021). Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, Chapter 3.3.4 (Avian Influenza). WOAH. link ↗
Bu sayfayı kaynak gösterin
ScholarGate. (2026, June 3). Hemagglutination Inhibition Assay. ScholarGate. https://scholargate.app/tr/veterinary-science/hemagglutination-inhibition
Hangi yöntem?
Bu yöntemi en yakın akrabalarının yanına koyup yan yana okuyun — kütüphane kitapları masaya serer; seçim sizindir.
- Enzim-Bağlı İmmünosorbent Deneyi (ELISA)Veteriner bilimleri↔ karşılaştır