โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง (Thin-layer chromatography - TLC) เป็นการแยกองค์ประกอบของสารสกัดจากพืชบนชั้นตัวดูดซับบางๆ ซึ่งจะสร้างรูปแบบของจุดที่ทำหน้าที่เป็นลายนิ้วมือทางเคมีสำหรับการทดสอบเอกลักษณ์ ในรูปแบบที่เป็นเครื่องมือ โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางประสิทธิภาพสูง (High-performance thin-layer chromatography - HPTLC) ได้ทำให้เทคนิคนี้เป็นมาตรฐานและเพิ่มการตรวจจับด้วยเครื่องวัดความหนาแน่น ทำให้เป็นวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายและค่อนข้างง่ายสำหรับการตรวจสอบความถูกต้องและกำหนดมาตรฐานของสมุนไพร

Definition

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางเป็นเทคนิคการแยกแบบระนาบที่องค์ประกอบของตัวอย่างเคลื่อนที่ด้วยอัตราที่แตกต่างกันบนชั้นคงที่บางๆ ภายใต้การทำงานของตัวทำละลายเคลื่อนที่ ทำให้เกิดรูปแบบที่ทำซ้ำได้ของโซนที่แยกจากกัน ซึ่งใช้เป็นลายนิ้วมือทางเคมีสำหรับการทดสอบเอกลักษณ์และความบริสุทธิ์

Scope

บทความนี้ครอบคลุมหลักการของการแยกแบบระนาบ การใช้ลายนิ้วมือ TLC และ HPTLC สำหรับการทดสอบเอกลักษณ์และความสม่ำเสมอของยาหยาบ และตำแหน่งของวิธีการเหล่านี้ในบรรดาวิธีการควบคุมคุณภาพทางโครมาโตกราฟี เป็นข้อมูลอ้างอิงทางระเบียบวิธีวิจัย ไม่ใช่คำแนะนำทางคลินิก

Core questions

• รูปแบบจุดของตัวอย่างตรงกับลายนิ้วมืออ้างอิงสำหรับยาที่ระบุหรือไม่?
• สามารถตรวจจับและหาปริมาณเบื้องต้นขององค์ประกอบเครื่องหมายเฉพาะโดยใช้เครื่องวัดความหนาแน่นได้หรือไม่?
• ลายนิ้วมือเผยให้เห็นการปลอมปน การทดแทน หรือองค์ประกอบที่ขาดหายไปหรือไม่?

Key concepts

• การแยกแบบระนาบบนชั้นคงที่
• ปัจจัยการหน่วง (Rf)
• ลายนิ้วมือทางโครมาโตกราฟี
• HPTLC ประสิทธิภาพสูงและการวัดความหนาแน่น
• สารประกอบเครื่องหมายและร่องรอยอ้างอิง
• รีเอเจนต์สำหรับการทำให้เกิดอนุพันธ์และการมองเห็น

Mechanisms

สารสกัดปริมาณเล็กน้อยจะถูกนำไปใช้กับแผ่นเคลือบ ซึ่งจะถูกพัฒนาในระบบตัวทำละลายเพื่อให้องค์ประกอบต่างๆ แยกออกจากกันตามความสัมพันธ์สัมพัทธ์กับเฟสคงที่และเฟสเคลื่อนที่ ซึ่งมีลักษณะเฉพาะด้วยปัจจัยการหน่วง (retardation factor) หลังจากการพัฒนา แผ่นจะถูกมองเห็นภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตหรือด้วยรีเอเจนต์ที่ทำให้เกิดอนุพันธ์ ทำให้เกิดรูปแบบของโซน การเปรียบเทียบร่องรอยตัวอย่างกับร่องรอยอ้างอิงและร่องรอยเครื่องหมายจะให้ลายนิ้วมือเอกลักษณ์ และใน HPTLC การสแกนด้วยเครื่องวัดความหนาแน่นช่วยให้สามารถวัดปริมาณกึ่งเชิงปริมาณได้ สภาวะ HPTLC ที่เป็นมาตรฐานช่วยปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำ ทำให้ลายนิ้วมือ TLC เป็นเครื่องมือที่ใช้งานได้จริงสำหรับการตรวจสอบความถูกต้องและกำหนดมาตรฐานของสมุนไพร (reich-schibli-2007, who-2011-qc, xie-2006)

Clinical relevance

ลายนิ้วมือ TLC และ HPTLC มีส่วนช่วยในการตรวจสอบเอกลักษณ์และความสม่ำเสมอของชุดสมุนไพร และในการตรวจจับการปลอมปน ซึ่งสนับสนุนการประกันคุณภาพผลิตภัณฑ์ บทความนี้อธิบายวิธีการวิเคราะห์และไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการตัดสินใจรักษาเฉพาะบุคคล

Evidence & guidelines

แนวทางการควบคุมคุณภาพของ WHO และตำรับยาใช้ลายนิ้วมือ TLC เป็นการทดสอบเอกลักษณ์สำหรับสมุนไพร และระเบียบวิธี HPTLC เฉพาะสำหรับพืชสมุนไพรได้กำหนดมาตรฐานแนวทางนี้ (who-2011-qc, reich-schibli-2007, evans-2009) การทบทวนการทำลายนิ้วมือทางโครมาโตกราฟีได้จัดตำแหน่ง TLC ควบคู่ไปกับ HPLC และเทคนิคอื่นๆ ภายในกรอบการประเมินคุณภาพตามลายนิ้วมือ (xie-2006)

History

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางกลายเป็นวิธีการแยกมาตรฐานในห้องปฏิบัติการในช่วงกลางศตวรรษที่ 20 และถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์พืชอย่างรวดเร็ว การปรับปรุงเครื่องมือเป็น HPTLC ด้วยเครื่องวัดความหนาแน่น ซึ่งพัฒนาขึ้นโดยเฉพาะสำหรับการวิเคราะห์พืชสมุนไพร ได้ทำให้เป็นเครื่องมือทำลายนิ้วมือประจำในการควบคุมคุณภาพสมุนไพร (reich-schibli-2007, evans-2009)

Seminal works

• reich-schibli-2007
• xie-2006

Frequently asked questions

ลายนิ้วมือ TLC คืออะไร?

เป็นรูปแบบที่ทำซ้ำได้ของโซนที่แยกจากกันซึ่งเกิดขึ้นเมื่อสารสกัดถูกพัฒนาบนแผ่นชั้นบาง การเปรียบเทียบรูปแบบนี้กับข้อมูลอ้างอิงช่วยยืนยันเอกลักษณ์ของยาและตรวจจับการปลอมปนได้

HPTLC แตกต่างจาก TLC ทั่วไปอย่างไร?

HPTLC ใช้แผ่นและเครื่องมือที่เป็นมาตรฐานและละเอียดกว่า รวมถึงการสแกนด้วยเครื่องวัดความหนาแน่น ซึ่งช่วยปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำและช่วยให้สามารถวัดปริมาณกึ่งเชิงปริมาณขององค์ประกอบที่แยกจากกันได้