โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง

โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) ใช้แยกองค์ประกอบของสารสกัดจากพืชบนคอลัมน์ที่บรรจุภายใต้ความดันสูง โดยมีเครื่องตรวจจับที่ช่วยให้สามารถสร้างโปรไฟล์ลายนิ้วมือที่เป็นลักษณะเฉพาะและการหาปริมาณสารประกอบบ่งชี้ได้อย่างแม่นยำ เป็นวิธีการทางเครื่องมือหลักสำหรับการกำหนดมาตรฐานเชิงปริมาณของวัสดุสมุนไพร และเป็นเครื่องมือสำคัญในการควบคุมคุณภาพทางเภสัชเวทสมัยใหม่

Definition

โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงเป็นเทคนิคการแยกแบบคอลัมน์ ซึ่งวัฏภาคเคลื่อนที่ที่เป็นของเหลวจะนำองค์ประกอบของตัวอย่างผ่านวัฏภาคคงที่ที่บรรจุอยู่ภายใต้ความดันสูง เพื่อแยกองค์ประกอบเหล่านั้นสำหรับการตรวจจับ เพื่อให้สามารถระบุได้ด้วยเวลาการคงอยู่และรูปแบบ และหาปริมาณเทียบกับสารมาตรฐานอ้างอิง

Scope

บทความนี้ครอบคลุมหลักการของโครมาโทกราฟีของเหลวแบบคอลัมน์ การใช้ HPLC สำหรับการทำลายนิ้วมือและการหาปริมาณสารบ่งชี้ในยาหยาบและสารสกัด และตำแหน่งของ HPLC ในบรรดาวิธีการควบคุมคุณภาพทางโครมาโทกราฟี เป็นข้อมูลอ้างอิงทางระเบียบวิธีวิจัย ไม่ใช่แนวทางทางคลินิก

Core questions

• โปรไฟล์ HPLC ของตัวอย่างตรงกับลายนิ้วมืออ้างอิงสำหรับวัสดุที่ระบุหรือไม่?
• ปริมาณสารบ่งชี้หรือสารออกฤทธิ์ที่หาได้มีปริมาณเท่าใดเมื่อเทียบกับข้อกำหนด?
• โครมาโทแกรมเผยให้เห็นการปลอมปน การทดแทน หรือองค์ประกอบที่เกินขีดจำกัดหรือไม่?

Key concepts

• โครมาโทกราฟีของเหลวแบบคอลัมน์ภายใต้ความดันสูง
• วัฏภาคคงที่และวัฏภาคเคลื่อนที่; การแยกแบบวัฏภาคผกผัน
• เวลาการคงอยู่และการแยก
• เครื่องตรวจจับ (UV/DAD, MS, ELSD)
• การหาปริมาณเทียบกับสารมาตรฐานอ้างอิง
• การทำลายนิ้วมือด้วย HPLC และสารประกอบบ่งชี้
• การวิเคราะห์ลายนิ้วมือด้วยเคมีเมตริกส์

Mechanisms

ปั๊มจะขับเคลื่อนวัฏภาคเคลื่อนที่ที่เป็นของเหลวซึ่งมีตัวอย่างที่ละลายอยู่ผ่านคอลัมน์ที่บรรจุด้วยอนุภาควัฏภาคคงที่ขนาดเล็ก องค์ประกอบต่างๆ จะแยกออกจากกันตามความแตกต่างของการแบ่งส่วนระหว่างวัฏภาค และถูกชะออกมาที่เวลาการคงอยู่ที่เป็นลักษณะเฉพาะ เครื่องตรวจจับ เช่น อัลตราไวโอเลตหรือไดโอดอาร์เรย์, แมสสเปกโทรเมตรี หรืออุปกรณ์กระจายแสงแบบระเหย จะบันทึกยอดที่ถูกชะออกมา ซึ่งสร้างทั้งโปรไฟล์ลายนิ้วมือ และโดยการสอบเทียบกับสารมาตรฐานอ้างอิง จะได้ปริมาณของสารบ่งชี้ การรวมลายนิ้วมือเชิงคุณภาพเข้ากับการหาปริมาณ—ซึ่งมักจะตีความด้วยเทคนิคเคมีเมตริกส์—เป็นพื้นฐานที่แข็งแกร่งสำหรับการยืนยันเอกลักษณ์ ความสม่ำเสมอ และการควบคุมปริมาณของวัสดุสมุนไพร (xie-2006, liang-2010, who-2011-qc)

Clinical relevance

HPLC สนับสนุนการยืนยันเอกลักษณ์และการวัดปริมาณสารบ่งชี้หรือสารออกฤทธิ์ในวัสดุสมุนไพรได้อย่างแม่นยำ ซึ่งเป็นหัวใจสำคัญในการบันทึกความสม่ำเสมอและคุณภาพของแต่ละชุด บทความนี้อธิบายวิธีการวิเคราะห์และไม่ใช่พื้นฐานสำหรับการตัดสินใจในการรักษาเฉพาะบุคคล

Evidence & guidelines

แนวทางการควบคุมคุณภาพของ WHO และตำรับยาใช้ HPLC สำหรับการยืนยันเอกลักษณ์และการหาปริมาณของวัสดุสมุนไพร และการทบทวนการทำลายนิ้วมือทางโครมาโทกราฟีได้กำหนดให้ HPLC ซึ่งมักใช้ร่วมกับเคมีเมตริกส์ เป็นแนวทางชั้นนำในการประเมินคุณภาพสมุนไพร (who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009)

History

โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงพัฒนามาจากโครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์แบบดั้งเดิมในช่วงปลายศตวรรษที่ 20 และกลายเป็นวิธีการแยกเชิงปริมาณที่โดดเด่นในการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรม การประยุกต์ใช้กับการทำลายนิ้วมือและการหาปริมาณสารบ่งชี้ทำให้เป็นรากฐานสำคัญของการกำหนดมาตรฐานยาแผนโบราณ ซึ่งมีการนำไปใช้ร่วมกับแมสสเปกโทรเมตรีและการวิเคราะห์ข้อมูลเคมีเมตริกส์มากขึ้นเรื่อยๆ (xie-2006, liang-2010, evans-2009)

Seminal works

• xie-2006
• liang-2010

Frequently asked questions

เหตุใด HPLC จึงเป็นที่นิยมสำหรับการกำหนดมาตรฐานเชิงปริมาณ?

เนื่องจากสามารถแยกองค์ประกอบบนคอลัมน์ด้วยเครื่องตรวจจับที่มีความไวสูงและสามารถสอบเทียบกับสารมาตรฐานอ้างอิงได้ จึงสามารถวัดปริมาณของสารบ่งชี้หรือสารออกฤทธิ์ได้อย่างแม่นยำ ซึ่งวิธีการเชิงคุณภาพที่ง่ายกว่าไม่สามารถทำได้

ลายนิ้วมือ HPLC คืออะไร?

คือรูปแบบลักษณะเฉพาะของยอดที่เวลาการคงอยู่ที่กำหนดซึ่งเกิดจากสารสกัด การเปรียบเทียบโปรไฟล์นี้กับข้อมูลอ้างอิงช่วยยืนยันเอกลักษณ์และความสม่ำเสมอ และสามารถวิเคราะห์ได้ด้วยเทคนิคเคมีเมตริกส์