Вспомогательные методы и молекулярные методы в цитопатологии
Вспомогательные методы — это лабораторные методы, применяемые к цитологическому материалу после исследования рутинных мазков, окрашенных по Папаниколау и Романовскому, с целью уточнения морфологического впечатления, классификации опухоли или выявления клинически значимых изменений. Они расширяют возможности цитологии за пределы одной лишь морфологии, позволяя получать иммунофенотипическую, цитогенетическую и молекулярную информацию из небольших образцов, таких как аспираты тонкой иглой, выпоты и эксфолиативные препараты.
Definition
Вспомогательные методы в цитопатологии — это дополнительные лабораторные исследования, проводимые на цитологических препаратах или остаточном клеточном материале для дополнения морфологического диагноза, включающие иммунофенотипические, цитогенетические, молекулярные и вычислительные методы.
Scope
Эта область знакомит читателя с основными вспомогательными методами, используемыми для цитологических образцов: иммуноцитохимией для белковых маркеров, флуоресцентной гибридизацией in situ для хромосомных и генных изменений, проточной цитометрией для иммунофенотипирования клеточных суспензий, молекулярным тестированием и тестированием на вирус папилломы человека на цитологическом материале, а также цифровой патологией с автоматизированным анализом изображений. Это структурный обзор; каждая методика подробно рассматривается в отдельном тематическом узле.
Sub-topics
Core questions
- Какой вспомогательный метод подходит для данного цитологического образца и диагностического вопроса?
- Как подготовка и фиксация образца влияют на достоверность иммуноцитохимических, FISH и молекулярных результатов?
- Как можно сортировать ограниченный цитологический материал, чтобы сохранить как морфологические, так и вспомогательные исследования?
Key concepts
- Адекватность и сортировка образца
- Приготовление клеточного блока
- Иммунофенотипирование
- Валидация и преаналитические факторы
- Рефлекторное и адъюнктивное тестирование
- Рабочие процессы, экономящие образец
Mechanisms
Цитологические образцы могут быть обработаны в виде прямых мазков, жидкостных препаратов, цитоспинов или клеточных блоков; выбранный метод приготовления определяет, какие вспомогательные методы применимы. Иммуноцитохимия локализует белковые антигены с помощью меченых антител, флуоресцентная гибридизация in situ визуализирует специфические последовательности ДНК с помощью флуоресцентных зондов, проточная цитометрия измеряет экспрессию антигенов на клетках в суспензии, а молекулярные анализы извлекают и исследуют нуклеиновые кислоты. Поскольку цитологический материал часто дефицитен, повторяющейся темой является сортировка образца таким образом, чтобы можно было выполнить как морфологическое, так и одно или несколько дополнительных исследований.
Clinical relevance
Вспомогательные методы расширяют спектр вопросов, на которые может ответить цитологический образец, поддерживая классификацию опухолей, определение клеточной линии и выявление биомаркеров, которые сообщаются наряду с морфологией. В качестве справочного материала эта область описывает, как генерируется такая информация; конкретный выбор и интерпретация тестов являются решениями клинической лаборатории и не являются индивидуальными рекомендациями здесь.
Evidence & guidelines
Профессиональные организации выпустили рамки валидации и отчетности, относящиеся к этим методам, включая руководство Колледжа американских патологов по валидации полнокадровой визуализации для диагностического использования (Pantanowitz et al., 2013). Доказательства, специфичные для метода, такие как секвенирование нового поколения, выполняемое непосредственно на материале аспирата тонкой иглой (Qiu et al., 2015), суммированы в соответствующих тематических узлах.
History
Цитопатология начиналась как чисто морфологическая дисциплина, основанная на окраске по Папаниколау. В последующие десятилетия иммуноцитохимия, затем гибридизация in situ и проточная цитометрия, а в последнее время молекулярное тестирование на основе нуклеиновых кислот и цифровой анализ изображений были адаптированы из гистопатологии и лабораторной медицины к меньшим, по-разному подготовленным образцам, встречающимся в цитологии.
Related topics
Seminal works
- fetsch-abati-2001
- pantanowitz-2013
Frequently asked questions
- Почему вспомогательные методы особенно важны в цитологии?
- Цитологические образцы часто невелики и лишены архитектуры, поэтому вспомогательные методы, добавляющие иммунофенотипическую или молекулярную информацию, часто позволяют получить окончательную классификацию, которую одна лишь морфология не может обеспечить.
- Что такое клеточный блок и почему он важен для вспомогательного тестирования?
- Клеточный блок — это парафинированный препарат, изготовленный из остаточного цитологического материала; он предоставляет срезы, пригодные для иммуноцитохимии, гибридизации in situ и молекулярной экстракции, что делает его ключевым инструментом для вспомогательных исследований цитологических образцов.