Иммуноцитохимия и клеточные маркеры

Иммуноцитохимия (ИЦХ) — это применение окрашивания на основе антител к цитологическим препаратам для выявления специфических белковых антигенов внутри или на поверхности клеток. Выявляя иммунофенотип клетки, она помогает определить клеточную линию, отличить реактивные процессы от неопластических, идентифицировать первичное место метастазирования и обнаружить маркеры, которые невозможно выявить только морфологически.

Definition

Иммуноцитохимия — это вспомогательный метод, при котором меченые антитела используются для локализации специфических белковых антигенов в цитологических препаратах, создавая иммунофенотипический профиль, дополняющий морфологическую диагностику.

Scope

Статья охватывает принцип локализации антиген-антитело на мазках, жидкостных препаратах, цитоспинах и клеточных блоках; панели маркеров, используемые для решения общих диагностических вопросов; а также преаналитические и интерпретационные факторы, специфичные для цитологического материала. Она рассматривает ИЦХ как методологическую тему, а не как источник диагностических протоколов.

Core questions

• Как подготовка и фиксация образца влияют на сохранение антигенов и качество окрашивания в цитологии?
• Какие панели маркеров позволяют различать основные дифференциальные диагнозы на данном цитологическом образце?
• Как следует сохранять ограниченный цитологический материал, чтобы можно было провести адекватную иммунопанель?

Key concepts

• Связывание антиген-антитело и системы детекции
• Клеточный блок в сравнении с мазком и жидкостными субстратами
• Панели маркеров вместо отдельных окрашиваний
• Маркеры клеточной линии и места происхождения
• Преаналитические переменные (фиксация, обработка)
• Валидация антител на цитологических субстратах

Mechanisms

Первичное антитело связывается со своей целевой антигенной мишенью в фиксированном цитологическом препарате, а затем связанное антитело визуализируется с помощью системы детекции, которая осаждает окрашенный хромоген или флуорофор в месте локализации антигена. Поскольку цитологические образцы готовятся различными способами — воздушно-сухие или фиксированные спиртом мазки, жидкостные среды, цитоспины и фиксированные формалином клеточные блоки — сохранение антигенов и фоновое окрашивание варьируются в зависимости от субстрата, поэтому нельзя предполагать, что антитела, валидированные для гистологии, будут вести себя идентично в цитологии. Интерпретация основывается на характере и распределении окрашивания по панели маркеров, выбранных для разрешения конкретного дифференциального диагноза, а не на каком-либо одном положительном результате.

Clinical relevance

Иммуноцитохимия способствует классификации опухолей, определению клеточной линии и идентификации вероятного первичного очага метастатического заболевания в цитологических образцах. В качестве справочного материала она описывает, как генерируется и интерпретируется иммунофенотипическая информация; выбор панелей антител и отчетность являются решениями лаборатории и не являются индивидуальными клиническими рекомендациями.

Evidence & guidelines

Обзоры иммуноцитохимии на цитологическом материале подчеркивают, что результаты сильно зависят от подготовки и валидации, и что маркеры должны применяться в виде панелей, интерпретируемых в морфологическом контексте (Fetsch & Abati, 2001; Hirokawa et al., 2024). Неоднократно подчеркивается валидация, специфичная для субстрата, поскольку эффективность антител может различаться между гистологическими срезами и цитологическими препаратами.

History

Локализация на основе антител, разработанная для тканевых срезов, постепенно адаптировалась к цитологии по мере улучшения химии детекции и методов сохранения антигенов. Цитология выпотов была ранней и влиятельной испытательной площадкой, где были собраны панели для отделения реактивных мезотелиальных клеток от метастатической карциномы, проблема, подробно рассмотренная Fetsch и Abati (2001).

Debates

Насколько применимы валидированные для гистологии антитела к цитологическим субстратам?

Поскольку фиксация и подготовка различаются для мазков, жидкостных сред и клеточных блоков, чувствительность и специфичность антител могут не переноситься с тканевых срезов, поэтому перед клиническим использованием рекомендуется валидация, специфичная для субстрата.

Seminal works

• fetsch-abati-2001

Frequently asked questions

В чем разница между иммуноцитохимией и иммуногистохимией?

Оба метода используют антитела для локализации антигенов, но иммуноцитохимия применяется к цитологическим препаратам, таким как мазки, жидкостные препараты и клеточные блоки, тогда как иммуногистохимия применяется к срезам тканей; различные субстраты требуют отдельной валидации.

Почему маркеры используются в панелях, а не по отдельности?

Ни один отдельный маркер не является полностью специфичным, поэтому панель, выбранная для решения определенного дифференциального диагноза и интерпретируемая вместе с морфологией, дает более надежный иммунофенотип, чем любое индивидуальное окрашивание.