Cultura e Isolamento de Fungos

A cultura fúngica é a prática de cultivar fungos a partir de uma amostra de paciente em meios artificiais para que um organismo viável possa ser recuperado, examinado, identificado e testado. Apesar de um tempo de resposta mais lento do que os métodos de detecção direta, a cultura permanece um padrão de referência porque produz um isolado vivo para identificação definitiva da espécie e teste de suscetibilidade antifúngica.

Definition

Cultura e isolamento de fungos é o conjunto de técnicas laboratoriais que recuperam fungos viáveis de material clínico, inoculando meios seletivos ou enriquecidos em condições que favorecem o crescimento fúngico, produzindo um isolado puro para posterior identificação e teste.

Scope

Este tópico abrange os princípios de recuperação de fungos de espécimes clínicos: meios seletivos e enriquecidos, condições de incubação, a distinção entre leveduras e bolores em cultura, e como um isolado puro apoia a identificação por morfologia, espectrometria de massa ou sequenciamento. Ele trata a cultura como um método laboratorial e não fornece protocolos de coleta de espécimes ou orientação de tratamento.

Core questions

• Quais meios e condições de incubação melhor recuperam o fungo suspeito em um determinado espécime?
• Como um isolado clinicamente significativo é distinguido da contaminação ambiental?
• Quando uma identificação baseada em cultura requer confirmação por sequenciamento ou espectrometria de massa?
• Quais são os limites da sensibilidade da cultura em doenças fúngicas invasivas?

Key concepts

• Meios seletivos e enriquecidos (por exemplo, ágar Sabouraud)
• Crescimento de leveduras versus bolores
• Temperatura e tempo de incubação
• Isolado puro e subcultura
• Contaminação versus patógeno verdadeiro
• Cultura como substrato para teste de suscetibilidade
• Identificação polifásica do isolado

Mechanisms

Os espécimes são inoculados em meios formulados para suportar o crescimento fúngico enquanto suprimem bactérias competidoras, classicamente ágar Sabouraud dextrose, às vezes com aditivos antibacterianos ou seletivos. Placas e tubos inclinados são incubados, frequentemente por períodos prolongados porque muitos fungos crescem lentamente, e em temperaturas escolhidas para revelar dimorfismo ou termotolerância. O crescimento é então avaliado: leveduras formam colônias pastosas, enquanto bolores produzem colônias filamentosas, frequentemente pigmentadas, cuja morfologia macroscópica e microscópica guia a identificação. O isolado puro que a cultura fornece é o substrato no qual as espécies são confirmadas por morfologia, espectrometria de massa MALDI-TOF ou sequenciamento de DNA, e no qual a suscetibilidade antifúngica é medida. Como organismos viáveis podem ser escassos, a cultura pode ser insensível em infecções profundas ou tratadas, razão pela qual é interpretada em conjunto com métodos diretos e moleculares.

Clinical relevance

A cultura sustenta grande parte de como os patógenos fúngicos são confirmados e nomeados, e uma cultura positiva de um local normalmente estéril carrega um peso diagnóstico particular dentro das definições de consenso de doença fúngica invasiva. Esta entrada descreve o método e seu valor interpretativo; é material de referência sobre como os isolados são obtidos e não é um guia para o manuseio de espécimes ou manejo do paciente.

Evidence & guidelines

Recomendações de melhores práticas da British Society for Medical Mycology e as definições de consenso EORTC/MSGERC descrevem o papel da cultura entre os métodos diagnósticos, incluindo seu peso quando fungos são recuperados de locais estéreis e sua conhecida insensibilidade em algumas infecções invasivas. Atlas de referência catalogam a morfologia de colônias e microscópica usada para identificar isolados.

History

A cultura em meios definidos foi a ferramenta fundamental da micologia médica, com o ágar Sabouraud dextrose, introduzido no início do século XX, tornando-se o substrato padrão para recuperar e identificar fungos. Durante a maior parte do século, a identificação baseou-se na morfologia de colônias e microscópica lida a partir da cultura, e somente mais tarde a espectrometria de massa e o sequenciamento adicionaram precisão à identificação do isolado cultivado.

Seminal works

• schelenz-2015
• dehoog-2020

Frequently asked questions

Por que a cultura fúngica geralmente leva tanto tempo?

Muitos bolores de importância médica e algumas leveduras crescem lentamente, então as culturas podem ser mantidas por dias a semanas para permitir o crescimento visível e a identificação confiável, o que é uma das razões pelas quais métodos diretos e moleculares mais rápidos são usados juntamente com a cultura.

Uma cultura fúngica positiva sempre significa infecção?

Não necessariamente. Fungos são comuns no ambiente e nas superfícies do corpo, então uma cultura positiva deve ser interpretada no contexto; a recuperação de um local normalmente estéril é muito mais significativa do que de um espécime contaminado ou colonizado.